Lenti-X™ p24 ELISAタイター測定キット

組換えレンチウイルスは現在、第3または第4世代が研究用に使用されている。これらはキャプシドタンパク質（p24）、核キャプシドタンパク質（p6とp7）、マトリクスタンパク質（p17）の4つの遺伝子をコードするgag遺伝子を共通に保持している。Lenti-X p24 Rapid Titer Kitは、ウイルス上清を用いてp24タンパク質量を測定するためのキットである。キャプシド（殻）中に存在するp24タンパク質（図1）の濃度は、レンチウイルスの実際のタイターと相関している。


図1. レンチウイルス粒子
p24タンパク質はHIV-1 gag遺伝子がコードする4つの遺伝子のうちの一つから作られ、レンチウイルスのキャプシド（殻）中に存在する。

使用方法

上清中の組換えレンチウイルスを添付のバッファーで溶解し、p24タンパク質を含んだサンプルを調製する。サンプルを96ウェルフォーマット（分割可能な8連ウェル×12、抗p24マウス抗体をコート済み）の各ウェルに加え、p24タンパク質を抗体に結合させる。
結合しなかったライセートを洗い流し、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬でp24タンパク質の濃度を測定する（図2）。本キットにはp24タンパク質が陽性コントロールとして含まれており、検量線の作成、サンプルのウイルス濃度の算出に使用できる。

	Lenti-X p24 Rapid Titer Kit (Single Wash)	Lenti-X p24 Rapid Titer Kit
二次抗体	HRP標識	ビオチン標識
操作時間	1.5時間	3時間
全操作ステップ	4ステップ	8ステップ
洗浄回数	1回	3回
p24測定範囲	100～1,600 pg/ml	12.5～200 pg/ml

図2．両キットの操作フロー


図3. Lenti-X p24 Rapid Titer Kit (Single Wash)の反応イメージ
培養上清と溶解バッファー、HRP標識二次抗体を混合したサンプルを調製し、抗p24マウス一次抗体コート済みのウェルに加え、インキュベートする。洗浄後、発色試薬を加えてp24タンパク質を検出する。


図4. Lenti-X p24 Rapid Titer Kitの反応イメージ
培養上清と溶解バッファーを抗p24マウス一次抗体コート済みのウェルに加え、インキュベートする。洗浄後、ビオチン標識二次抗体、ストレプトアビジン-HRPを順番に反応させた後、発色試薬を加えてp24タンパク質を検出する。

Lenti-X p24 Rapid Titer Kit (Single Wash)（製品コード 631476）

• Anti-p24 Coated Plate (12×8-well microtiter strips) 　1 plate
• p24 Control　500 ng
• p24 Reconstitution Buffer　1.5 ml
• Diluent Buffer　20 ml
• Lysis Buffer　4 ml
• Anti-p24 (HRP Conjugate)　12 ml
• Washing Buffer (20X)　50 ml
• TMB Substrate　12 ml
• Stop Solution　12 ml

Lenti-X p24 Rapid Titer Kit（製品コード 632200）

• Anti-p24 Coated Plate (96 wells×1)
• p24 Control (10 ng/ml)　100 μl
• Lysis Buffer　6 ml
• Anti-p24 (Biotin Conjugate)　12 ml
• Streptavidin HRP　12 ml
• Washing Buffer (20X)　120 ml
• TMB Substrate　12 ml
• Stop Solution　12 ml

製品コード 631476　4℃（Washing Buffer (20X)のみ開封後は室温）
製品コード 632200　4℃