製品説明
内容
*1 TaKaRa Ex Taq HS、反応Buffer、dNTP mixtureを含む2倍濃度のPCR反応試薬である。
*2 16S rDNA Primer Mix (bacterial) に含まれるプライマーは、Sequencing Primer F1(bacterial) およびSequencing Primer R1 (bacterial) と同じ配列である。
保存
-20℃
Premix Ex Taq HSは、過剰に凍結融解を繰り返すと活性が低下する場合があるのでご注意ください。
融解の際は激しい攪拌は避け、融解後は穏やかにチューブを転倒混和してください。
DNA増幅産物のシーケンス解析
得られた精製増幅産物をシーケンス解析する。
シーケンス用のプライマーは4種類用意しているが、取扱説明書「内容」で示している位置関係から、適宜プライマーを選択して使用する。
<シーケンスプライマーの選択>
◎片鎖解析の場合
- Sequencing Primer F1 とSequencing Primer R1の2種類のプライマーで増幅産物全体のシーケンスデータを得ることはできるが、中央部分の精度がやや低下する。
- 上記2 種類にSequencing Primer F2 あるいはSequencing Primer R2のどちらかを加えた3種類のプライマーを使用すると、より精度の高い結果が得られる。
◎両鎖解析の場合
Sequencing Primer F1、Sequencing Primer F2、Sequencing Primer R1、Sequencing Primer R2の4種類のプライマーを使用する。精度の高いシーケンスデータが得られる。
シーケンス解析には、
タカラバイオ受託サービス「プレミックスシーケンス解析」のご利用をお勧めします。
<プレミックスシーケンス解析にご依頼いただく場合>
Sequencing Primerごとに以下の混合物を準備する。
精製増幅産物 | 20~150 ng |
Sequencing Primer (7.5 pmol/μl) | 1 μl |
滅菌精製水 | 全量を15 μl とする |
上記混合物を1 つのウェルに分注する。
- 精製して得られた増幅産物を1反応につき20~150 ngご用意ください。(1 サンプルについて最大4反応となりますので、最大80~600 ngの精製増幅産物が必要となります。)
- 1つの反応ウェルについて1 つのSequencing Primer (7.5 pmol/μl) 1 μl を加え、全量を15 μl/ウェルとなるように調製いただき、ご送付ください。
詳細は弊社ウェブサイトをご参照ください。
プレミックスシーケンス解析
シーケンスは、ご自身で行われることも可能です。
その場合、キットのシーケンス用プライマーは7.5 pmol/μlとなっているので、適宜使用量を調整して使用してください。
塩基配列情報の解析
キット以外に必要な試薬・機器(主なもの)
- 遺伝子増幅システム(authorized instruments)
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch(製品コード TP350)
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient(製品コード TP600)
- PCRチューブ
0.2 ml Hi-Tube Dome Cap(製品コード NJ200)
0.2 ml Hi-8-Tube(製品コード NJ300)
0.2 ml Hi-8-Dome Cap(製品コード NJ301)
0.2 ml Hi-8-Flat Cap(製品コード NJ302)
- アガロース電気泳動装置
Mupid-2plus(製品コード M-2P)
Mupid-exU(製品コード EXU-1)
Mupid-One(製品コード O1-01)
- アガロースゲル
Agarose L03「TAKARA」(製品コード 5003/5003B)
PrimeGel Agarose PCR-Sieve(製品コード 5810A)など
- DNA染色剤
SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain(製品コード 5760A/5761A)、またはエチジウムブロマイド
注)SYBR Green I を使用する場合は専用のフィルターが必要です。
- マイクロ遠心機
- マイクロピペットおよびチップ(オートクレーブ処理したもの)
- DNA調製試薬
SimplePrep reagent for DNA(製品コード 9180)
NucleoSpin Tissue(製品コード 740952.10/.50/.250)など
- PCR産物精製試薬
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up(製品コード 740609.10/.50/.250)など