SMARTer^® RACE 5'/3' Kit

SMARTer RACE KitはSMARTer技術を用いたRACE用のキットで、アダプターライゲーションを行うことなくcDNA合成が可能である。合成されたcDNAはそのまま5' RACE PCRや3' RACE PCRに用いることができ、操作時間の短いシンプルなプロトコールとなっている。
SMARTer RACE 5'/3' Kitは、従来のSMARTer RACE cDNA Amplification Kitを改良し、感度が高く、バックグラウンドが低減され、特異性も向上している。
また、本製品は従来品に比べて多くのRNAサンプル液量を使用でき（最大11 μl）、さらに増幅が難しいターゲット配列（長鎖、GC richなど）も効率的にクローニング可能である。
製品にはPCR酵素、In-Fusion Snap Assembly Master Mix、線状化済みベクター、コンピテントセルも含まれており、増幅したRACE産物はIn-Fusion法により直接クローニングすることができる。

・かつてない使い勝手の良さ
SMARTer RACE法では、1本のチューブで2段階の操作を行う。必要な操作を最小限に抑えて、RACE産物取得までの所要時間はわずか4時間

・全てが含まれた完全なキット
cDNA合成からRACE産物のクローニングまでに必要な試薬が全て含まれており、クローニングは2日で完了

・total RNAの最少必要量はわずか10 ng、使用できる液量は最大11 μl
生検や穿刺吸引で採取した組織の他に胚組織やまれな疾患の組織など、少量サンプルが利用可能。最適化されたプロトコールにより非特異的バックグラウンドを大幅に低下するため、極めて少量の試料を取り扱う場合に非常に有効

・5'末端を特異的に増幅
cDNAの5'末端に特異的にハイブリダイズする化学修飾されたSMARTer Oligoを設計。SMARTer Oligoにより5'末端配列を多く含むcDNAを調製し、完全な目的遺伝子や上流領域をより効率良くクローニングできる。

・RNAの前処理は不要
PolyA RNAまたはtotal RNAが使用可能である。ゲノムDNAが混入している場合でもDNaseによる前処理なしで使用できる。


図1．SMARTer RACE 5'/3' Kitの操作フロー


図2．SMARTer RACEキットによる5’RACEフロー

Box 1
・SMARTer II A Oligonucleotide
・Control Mouse Heart Total RNA
Box 2
・3' RACE CDS Primer A
・5' RACE CDS Primer A
・10X Random Primer Mix
・5X First-Strand Buffer
・dNTP mix
・Dithiothreitol
・Deionized H₂O
・Tricine-EDTA Buffer
・SMARTScribe Reverse Transcriptase
・RNase Inhibitor
・10X Universal Primer A Mix (UPM)
・Control 5'-RACE TFR Primer
・Control 3'-RACE TFR Primer
・Universal Primer Short
・Linearized pRACE
SeqAmp DNA Polymerase（製品コード 638504）
In-Fusion Snap Assembly Master Mix（製品コード 638947）
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10）
Stellar Competent Cells（製品コード 636763）

Box 1：－70℃
Box 2：－20℃
SeqAmp DNA Polymerase：－20℃
In-Fusion Snap Assembly Master Mix：－20℃
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up ：室温
Stellar Competent Cells
　　Stellar Competent Cells：－70℃
　　SOC Medium、pUC19 Vector：－20℃