長鎖DNAもメチル化DNAもOK！高効率コンピテントセル
SOC培地添付
- ルーチンクローニングはもちろん、長鎖DNA（10 kb以上）のクローニングにもおススメ！
- メチル化DNAのクローニングも可能
- エレクトロポレーション法によるcDNAライブラリーやゲノムライブラリー、BACライブラリーの作製に最適
製品説明
Electro-Cellsは、エレクトロポレーション法のために調製したコンピテントセルである。この方法は高電圧パルスで細胞膜を破断することにより DNAを細胞内に移入するもので、形質転換効率および結果の再現性に優れており、少量のサンプルを短時間で大腸菌に導入する際、特に威力を発揮する。
E. coli HST08 Premiumは外来のメチル化DNAを切断する遺伝子群mrr-hsdRMS-mcrBC, とmcrAを欠失している。その上、非常に高い形質転換能力を持っているため、メチル化されたDNAのクローニングから、遺伝子ライブラリーの作製、BACベクターなどを使用した長鎖ゲノムライブラリー作製等に広く使用できる。
また長鎖プラスミドDNAの形質転換能力にも優れており、同様の遺伝子型を持つ他のコンピテントセルと比較してコロニー形成速度も速いため、TaKaRa DNA Ligation Kit LONG（製品コード 6024）と組み合わせることで、10 kb以上の長鎖DNA断片のクローニングやライブラリー作製も容易に行える。
pUC系プラスミドでの形質転換の際には、β-ガラクトシダーゼのα-相補性を利用し、X-Gal添加により組換え体の選別が容易となる。
(X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside)
E. coli HST08 Premiumは外来のメチル化DNAを切断する遺伝子群mrr-hsdRMS-mcrBC, とmcrAを欠失している。その上、非常に高い形質転換能力を持っているため、メチル化されたDNAのクローニングから、遺伝子ライブラリーの作製、BACベクターなどを使用した長鎖ゲノムライブラリー作製等に広く使用できる。
また長鎖プラスミドDNAの形質転換能力にも優れており、同様の遺伝子型を持つ他のコンピテントセルと比較してコロニー形成速度も速いため、TaKaRa DNA Ligation Kit LONG（製品コード 6024）と組み合わせることで、10 kb以上の長鎖DNA断片のクローニングやライブラリー作製も容易に行える。
pUC系プラスミドでの形質転換の際には、β-ガラクトシダーゼのα-相補性を利用し、X-Gal添加により組換え体の選別が容易となる。
(X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside)
内容
| E. coli HST08 Premium Electro-Cells | 50 μl×10本 |
| pUC19 DNA (10 pg/μl) | 10 μl |
| SOC Medium* | 1 ml×10本 |
* SOC Mediumの組成 ：
【ご注意】| 2% | Tryptone | |
| 0.5% | Yeast extract | |
| 10 mM | NaCl | |
| 2.5 mM | KCl | |
| 10 mM | MgSO4 | |
| 10 mM | MgCl2 | |
| 20 mM | Glucose |
SOC Mediumを溶かした際に、稀に沈殿が生じる場合がありますが、品質には全く問題ありません。
沈殿が生じた場合は、室温で混ぜるかもしくは37℃で数分間温めて沈殿を溶かしてご使用ください。
保存
－80℃
品質
1）形質転換効率
取扱説明書の方法に従い、10 pgのpUC19プラスミドDNAで形質転換し、Amp+のプレートでコロニーを選別した。このとき、>1×109 transformans/μl pUC19プラスミドDNAの効率を得た。
2）β-ガラクトシダーゼのα-相補性の確認
pUC19DNAを用いて形質転換を行い、100 μg/mlのアンピシリン、60 μg/ml X-Galを含む L-寒天培地にプレートした場合、青色のコロニーが出現することを確認している。
取扱説明書の方法に従い、10 pgのpUC19プラスミドDNAで形質転換し、Amp+のプレートでコロニーを選別した。このとき、>1×109 transformans/μl pUC19プラスミドDNAの効率を得た。
2）β-ガラクトシダーゼのα-相補性の確認
pUC19DNAを用いて形質転換を行い、100 μg/mlのアンピシリン、60 μg/ml X-Galを含む L-寒天培地にプレートした場合、青色のコロニーが出現することを確認している。
Genotype
F－, endA1, supE44, thi-1, recA1, relA1, gyrA96, phoA, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), ΔmcrA, λ－
（K-12株由来大腸菌）
Cell density
1×1010 bacteria/ml
プラスミドスクリーニングに使用する抗生物質と選択濃度
| 抗生物質 | アンピシリン | カナマイシン | クロラムフェニコール | ストレプトマイシン | テトラサイクリン |
|---|---|---|---|---|---|
| 濃度（μg/ml） | 100 | 50 | 20 | 50 | 20 |
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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