単独で糸状菌のプロトプラストが調製可能
製品説明
Corynebacterium sp. OZ-21の培養上清より調製された、キチナーゼ、キトビアーゼを主体とする複合酵素剤である。
●熱安定性に優れている。
●キチナーゼ、キトビアーゼ活性を有する。
●単独で糸状菌のプロトプラストが調製できる。
黒麹菌などの糸状菌にはYatalase -Plus-（製品コード T030）がおススメです。
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保存
4℃乾燥状態
形状
凍結乾燥粉末（賦形剤として乳糖を含む）
規格
| キチナーゼ活性 | ： | 50 U/g powder以上 |
| キトビアーゼ活性 | ： | 500 U/g powder以上 |
| 細胞壁溶解活性 | ： | 約10,000 U/g powder |
由来
Corynebacterium sp. OZ-21
キチナーゼ活性測定
活性の定義：下記の条件で、1分間に1 μmolのN-Acetylglucosamineを遊離する酵素活性を1 Uとする。
測定法
測定法
| 試薬A: | 酢酸緩衝液 |
|---|---|
| 0.82 gの酢酸ナトリウムを約90 mlの蒸留水に溶解する。この溶液に酢酸を少量ずつ加えながらpH6.0に調製する。100 mlにフィルアップし、0.1 M酢酸緩衝液とする。 | |
| B: | 基質液 |
| キチン粉末を0.5％になるようにA液を懸濁させ、基質液とする。 | |
| C: | 酵素液 |
| 0.8 mg/mlとなるように蒸留水に溶解する。 | |
| 手順1. | L字型試験管にB液1 mlとり、37℃にて5～10分間プレインキュベートする。 |
| 2. | C液0.2 mlを添加後、37℃にて1時間おだやかに振とうしながら反応を行う。 |
| 3. | 加熱失活（5分間煮沸）後、反応液を遠心分離（3,000 rpm、10分間）し、上清中のN-Acetylglucosamine量をReissig法により測定する。 |
| 4. | 酵素反応により遊離したN-Acetylglucosamine量を標準曲線により算出する。 |
キトビアーゼ活性測定
活性の定義：下記の条件で1分間に1μmolのp-Nitrophenolを遊離する酵素活性を1 Uとする。
測定法
測定法
| 試薬A： | MclLvaine緩衝液 |
|---|---|
| 0.1 Mクエン酸（クエン酸2.1 gを蒸留水に溶かして100 mlとする）に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム溶液（リン酸水素二ナトリウム＋二水和物10.74 gを蒸留水に溶かして、150 mlとする）を加えながらpH6.0に調製する。 | |
| B： | 基質液 |
| p-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide 8.56 mgをA液5.0 mlに溶解する。 | |
| C： | 酵素液 |
| 0.8 mg/mlとなるように蒸留水に溶解する。 | |
| D： | 反応停止液 |
| 炭酸ナトリウム（無水）2.65 gを蒸留水に溶かして100 mlとする。 | |
| 手順1. | L字型試験管にA液0.75 mlとB液0.2 mlを入れ、37℃にて5～10分間プレインキュベートする。 |
| 2. | C液50 μlを添加し、すばやく試験管ミキサーで良く混合して反応を開始する。 |
| 3. | 10分間おだやかに振とう後、D液2.0 mlを添加し、すばやく混合後、405 nmの吸光度を測定する。 |
| 4. | 酵素反応により遊離したp-Nitrophenol量を、標準曲線により算出する。 |
細胞壁溶解活性測定
活性の定義：下記の条件で1時間に660 nmにおける濁度を1％減少させる酵素活性を1 Uとする。
測定法
測定法
| 試薬A： | 基質液 |
|---|---|
| Aspergillus oryzae菌体（Dextrin-Peptone培地、25～30℃で1～2日間振とう培養）をワーリングブレンダーでホモジナイズする（16,000 rpm、3分間）。次に菌糸体が小断片化するまでフレンチプレス処理を行い、ろ紙上で充分に水洗した後、アセトンさらにジエチルエーテルで洗浄する。これを風乾したもの（細胞壁画分）を0.125％になるように0.1 M酢酸緩衝液（pH6.0）に均一に懸濁し、基質液とする。 | |
| B： | 酵素液 |
| 0.8 mg/mlとなるように蒸留水に溶解する。 | |
| 手順1. | 試験管にA液4 mlをとる。 |
| 2. | B液1 mlを添加し、すばやく試験管ミキサーで良く混合して37℃で反応を開始する。 |
| 3. | 1時間おだやかに振とう後、660 nmの濁度をすばやく測定する。 |
一般的性質
至適pH : pH7.2
至適温度 : 37℃
至適温度 : 37℃
 |
 |
| 図1 pH-活性、安定性曲線 |
図2 温度-活性、安定性曲線 |
| （pH安定性：指定のpHで酵素溶液を1時間置いた後の酵素活性） | （温度安定性：指定の温度で酵素溶液を１時間置いた後の酵素活性） |
表1 各種酵素活性
* キトサナーゼ、β-1,3-グルカナーゼ、プロテアーゼの値は代表サンプル値であり、規格値ではない。
| 酵 素 | 活 性 （U/g powder） |
|---|---|
| キチナーゼ | 50以上 |
| キトビアーゼ | 500以上 |
| キトサナーゼ* | 19 |
| β-1,3-グルカナーゼ* | 300 |
| プロテアーゼ* | 31 |
| 細胞壁溶解活性 | 10,000 |
本製品は大関株式会社で製造されたものです。
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