Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素はDNAまたはRNAの5’末端にATPのγ位のリン酸基を添加する酵素である。ATPの存在下では、5’-OH末端のリン酸化反応が起こる。このとき同時に標識したATPをいれておくと、リン酸転移反応も同時に起こり、5’末端が標識されたものと交換される（交換反応）。
保存
－20℃
濃度
10 U/μl
形状
| 50 mM | Tris-HCl（pH7.5） |
| 50 mM | KCl |
| 1 mM | DTT |
| 0.1 μM | ATP |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 500 mM | Tris-HCl（pH8.0） |
| 100 mM | MgCl2 |
| 50 mM | DTT |
活性の定義
Micrococcal nucleaseで活性化した仔牛胸腺DNAを基質として、37℃、pH7.6において、30分間に1 nmolの[γ-32P]ATPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 50 mM | Tris-HCl（pH7.6） |
| 10 mM | MgCl2 |
| 1 mM | DTT |
| 100 μM | [γ-32P]ATP |
| 0.2 mg/ml | 5'-OH DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
用途
- DNAおよびRNAの5’末端の標識
- 合成DNAリンカーの5’末端のリン酸化
起源
Escherichia coli carrying the plasmid encoding T4 pse T gene
一般的性質
- 分子量
約140,000 - サブユニット
分子量33,000のサブユニットホモオリゴマー。活性発現時はテトラマーであると推定される。 - 至適pH
リン酸化反応、交換反応、脱リン酸化反応のそれぞれで至適pHが異なる。
リン酸化反応：pH6.5～8.5、交換反応：pH6.2～6.6、脱リン酸化反応：pH6.0 - 補因子
Mg2＋（10 mM at pH7.6）を要求。他にMn2＋、Zn2＋でも可。
還元剤要求性（5 mM DTTで最大活性を示す。10 mM 2-メルカプトエタノールあるいは10 mMグルタチオンで代用できるが、それぞれ5 mM DTTのときの活性に対して、80％、70％に活性が低下する）。 - 阻害剤
リン酸、ピロリン酸、リン酸ナトリウム：7 mM 50％阻害5）
硫安：7 mM 75％阻害
- 注意事項
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