Alkaline Phosphatase特性比較

主要なAlkaline Phosphataseである大腸菌由来の酵素（BAP）と仔牛小腸由来の酵素（Calf Intestinal Alkaline Phosphatase、CIAP）について、両者の特性比較を下表に示します。

表１ BAPとCIAPの特性比較

BAP CIAP
分子量 約80,000 約100,000
サブユニット 2 2
金属イオン Zn2＋ Zn2＋
糖鎖 なし ある
至適pH
(測定条件)		 8.0
(1 M Tris-HCI, 1 mM pNPP)		 9.8
(1 M diethanolamine, 15 mM pNPP)
Tris濃度の影響 *1  1 M 100% 100%
0.1 M 35% 25%
0.01 M 21% 14%
温度の影響 *2      25℃ 100% 100%
37℃ 140% 135%
50℃ 222% 139%
56℃ 282% 182%
65℃ 412% 129% *3
熱安定性（65℃） active 30分で失活
pNPP：p-nitrophenyl phosphate
*1 各々の酵素活性測定条件（後述の各製品説明の項参照）を100%としたときのTris濃度の影響を調べている。
*2 添付Buffer条件下、10分間反応時の活性の影響を調べている。
*3 反応時間中に失活

上記のように、BAP、CIAPは熱安定性が差があるため、失活条件が異なります。BAPは非常に安定性の高い酵素であり、反応終了後少なくとも2回フェノール処理を行う必要があります。CIAPは、キレート剤存在下65℃、30分の熱処理で99%以上の活性が不可逆的に失活しますが、使用条件によっては不充分な場合もあるため、完全に失活させるためにはフェノール処理を行ってください。
平滑末端や5'陥没末端の脱リン酸化は一般的に効率が低いため、BAPを用いた高温（55～60℃）での脱リン酸化反応を推奨します。

修飾酵素の用途一覧

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