SOC培地添付
E. coli Competent Cells について
MandelとHigaによる大腸菌における形質転換法の確立は、組換えDNA実験の重要な基礎となった。大腸菌をCaイオン存在下に置くと外来DNA（プラスミド、ファージDNA）を細胞内に取り込む“コンピテント”状態になり、この状態の細胞をコンピテントセルと称している。
組換えDNA実験では、コンピテントセルを用いた形質転換、形質導入等がよく行われるが、効率が高く再現性のよいコンピテントセルの作製は難しいとされている。遺伝子ライブラリーの作製、組換え体プラスミドの作製やサブクローニング等、特に目的とする遺伝子の含量が少ない場合では導入効率の高いコンピテントセルを用いることが重要となる。
タカラバイオでは、Hanahanの方法を改良した新しい方法により、効率の高い8種類のCompetent Cells E. coli HST08 Premium、HST02、HST04 dam－/dcm－、JM109、DH5α、HB101、CJ236、MV1184（これらは全てEK1系の宿主大腸菌である）を調製している。
組換えDNA実験では、コンピテントセルを用いた形質転換、形質導入等がよく行われるが、効率が高く再現性のよいコンピテントセルの作製は難しいとされている。遺伝子ライブラリーの作製、組換え体プラスミドの作製やサブクローニング等、特に目的とする遺伝子の含量が少ない場合では導入効率の高いコンピテントセルを用いることが重要となる。
タカラバイオでは、Hanahanの方法を改良した新しい方法により、効率の高い8種類のCompetent Cells E. coli HST08 Premium、HST02、HST04 dam－/dcm－、JM109、DH5α、HB101、CJ236、MV1184（これらは全てEK1系の宿主大腸菌である）を調製している。
製品説明
部位特異的変異処理用ssDNA調製宿主E. coli CJ236
E. coli CJ236は、dut、ung変異を持つ大腸菌で、dUTPase（Dut）とUracil-DNA glycosylase（Ung）を欠損している。そのため、DNA中のThymine（T）の一部がdeoxyuracil（dU）に置き換わったDNAを合成する。
Kunkel法は、このような大腸菌を使用してsite-directed mutagenesisを行う方法で、このCJ236を宿主菌とし、変異を導入したい遺伝子をpUC118/119、M13ファージ等一本鎖DNAを調製できるベクターにクローニングしてssDNAを調製することにより、Kunkel法に使用できるdeoxyuracil含有DNAが得られる。F'プラスミド（pCJ105）はクロラムフェニコール耐性遺伝子を含んでいるため、クロラムフェニコール存在下で安定に保持される。
E. coli CJ236は、dut、ung変異を持つ大腸菌で、dUTPase（Dut）とUracil-DNA glycosylase（Ung）を欠損している。そのため、DNA中のThymine（T）の一部がdeoxyuracil（dU）に置き換わったDNAを合成する。
Kunkel法は、このような大腸菌を使用してsite-directed mutagenesisを行う方法で、このCJ236を宿主菌とし、変異を導入したい遺伝子をpUC118/119、M13ファージ等一本鎖DNAを調製できるベクターにクローニングしてssDNAを調製することにより、Kunkel法に使用できるdeoxyuracil含有DNAが得られる。F'プラスミド（pCJ105）はクロラムフェニコール耐性遺伝子を含んでいるため、クロラムフェニコール存在下で安定に保持される。
内容
| E. coli CJ236 Competent Cells | 100 μl×10本 |
| pUC119 DNA (0.1 ng/μl) | 10 μl |
| SOC Medium* | 1 ml×10本 |
* SOC Mediumの組成 ：
【ご注意】| 2％ | Tryptone | |
| 0.5％ | Yeast extract | |
| 10 mM | NaCl | |
| 2.5 mM | KCl | |
| 10 mM | MgSO4 | |
| 10 mM | MgCl2 | |
| 20 mM | Glucose |
SOC Mediumを溶かした際に、稀に沈殿が生じる場合がありますが、品質には全く問題ありません。
沈殿が生じた場合は、室温で混ぜるかもしくは37℃で数分間温めて沈殿を溶かしてご使用ください。
保存
－80℃
E. coli CJ236 Genotype
dut1, ung1, thi-1, relA1/pCJ105（F' camr）
Cell density
1～2×109 bacteria/ml
品質
形質転換効率
1 ngのプラスミドDNAで形質転換した場合
100μl E. coli CJ236 Competent Cells/1 ng pUC119 plasmid
＞1×107 transformants/1 μg pUC119 plasmid DNA
1 ngのプラスミドDNAで形質転換した場合
100μl E. coli CJ236 Competent Cells/1 ng pUC119 plasmid
＞1×107 transformants/1 μg pUC119 plasmid DNA
プラスミドスクリーニングに使用する抗生物質と選択濃度
| 抗生物質 | アンピシリン | カナマイシン | クロラムフェニコール | ストレプトマイシン | テトラサイクリン |
|---|---|---|---|---|---|
| 濃度（μg/ml） | 100 | 50 | NA | 50 | 20 |
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
