RACE用 Marathon^®-Ready cDNA（ラット）

Marathon-Ready cDNAは高品質なPremium Poly A⁺ RNAから作製したcDNAであり、Marathon Adaptorが連結されているため、そのまま5’-RACEと3’-RACE PCRに使用可能である（1）。各種Marathon-Ready cDNAは組織特異的な二本鎖cDNAのプールとして作製済みであり、遺伝子特異的プライマーをセットにして用いることにより、全長の各種遺伝子を増幅することができる。また、組織特異的な遺伝子発現の研究、mRNAの多型性の検出、多重遺伝子ファミリーに属するmRNAの検討にも使用可能である。
Marathon-Ready cDNAは、3’側の不均一性を排除し、全長cDNAを作製するために最適化した方法を用いて、Premium RNAから合成する（2、3）。合成後に平滑末端を形成させ、二本鎖cDNAの両端にMarathon Adaptorを連結している。
各Marathon-Ready cDNAには、30反応分のcDNA（濃度～0.1 ng/ μl）、アダプタープライマー、nested用アダプタープライマー、5’と3’のG3PDHコントロールプライマーが含まれている。Marathon-Ready cDNAを用いて5’-および3’-RACEを行う際は、目的遺伝子の遺伝子特異的プライマーとPCR用のポリメラーゼミックスを別途用意する。ポリメラーゼには、Advantage 2 Polymerase Mixの使用をお勧めする。

図1. end-to-end 増幅によるアダプターライゲート済みds cDNAからの全長cDNAの作製
以下に示すプライマーを用いて、各鋳型からRACE PCRによる増幅を行った。レーン1～3にはHuman Placenta Marathon-Ready cDNA（#639311）、レーン4, 5にはHuman Skeletal Muscle Marathon-Ready cDNA（#639313）を鋳型として用いた。
レーン1：TFR cDNAの5’-RACE産物
レーン2：TFR cDNAの3’-RACE産物
レーン3：5’および3’の両TFRプライマーを用いたend-to-end増幅で作製した全長TFR cDNA（5.1 kb）
レーン4：5’および3’の両IGFR 2プライマーで増幅した、ほぼ全長のIGFR2 cDNA（8.8 kb）
レーン5：5’および3’の両IGFRプライマーで増幅した、全長のIGFR1 cDNA（5.0 kb）
レーンM：1 kb DNAラダー

図2. G3PDHプライマーを用いてヒト、マウス、ラットのHeart Marathon-Ready cDNAから増幅したMarathon RACE産物
RACE PCRにはAP1プライマーおよびポジティブコントロールであるG3PDHプライマーを用いた。鋳型には、Human Heart（#639304）、Mouse Heart（#639409）、Rat Heart（#639416）の各Marathon-Ready cDNAsを用いた。
レーンM：1 kb DNAラダー

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