- 酵母MEL1遺伝子の活性化を培養プレート上で直接アッセイ
- 酵母ツーハイブリッド相互作用の確認に
X-α-Galは、酵母MEL1遺伝子がコードする分泌型酵素α-galactosidaseの呈色基質である。MEL1遺伝子はツーハイブリッド解析で用いられるGAL4の調節を受ける遺伝子であり、その活性化をX-α-Galを含む培養プレート上で直接検出できる（1）。X-α-Galを用いれば、時間のかかるβ-galactosidaseフィルターリフトアッセイを行う必要がなく、迅速かつ簡単にツーハイブリッドアッセイが行える。
α-galactosidaseは無色のX-α-Galを加水分解して青色の最終産物を生成するため（2）、X-α-Gal指示プレート上で培養を行った場合、ツーハイブリッド相互作用によりα-galactosidaseを発現する陽性の酵母コロニーは青く染色される（図1）。
図1. X-α-Galを用いた酵母ツーハイブリッド解析での陽性クローンの選択
MEL1遺伝子をレポーターとするGAL4系のTwo-Hybrid解析をX-α-Gal指示プレート上で行った場合、α-galactosidaseを発現する陽性コロニーはX-α-Galを加水分解して青く染色される。
表1. MEL1を有する酵母株
※他の酵母株がMEL1遺伝子を有するか否かは、完全長の野生型GAL4を発現するプラスミドで菌株を形質転換するか、相互作用が既知のタンパク質を発現するGAL4系プラスミドのペア（例えばMatchmaker Gold SystemコントロールベクターのpGADT7-TとpGBKT7-53）をコトランスフォームすることにより調べることができます。
表2. 作製できるライブラリープレート数の目安
なお、X-α-Galは20～25 mg/Lの濃度で培地に加えても使用できます。
α-galactosidaseは無色のX-α-Galを加水分解して青色の最終産物を生成するため（2）、X-α-Gal指示プレート上で培養を行った場合、ツーハイブリッド相互作用によりα-galactosidaseを発現する陽性の酵母コロニーは青く染色される（図1）。
図1. X-α-Galを用いた酵母ツーハイブリッド解析での陽性クローンの選択
MEL1遺伝子をレポーターとするGAL4系のTwo-Hybrid解析をX-α-Gal指示プレート上で行った場合、α-galactosidaseを発現する陽性コロニーはX-α-Galを加水分解して青く染色される。
表1. MEL1を有する酵母株
| ＋ | － |
| Y2HGold | HF7c |
| Y190 | CG1945 |
| AH109 | SFY526 |
| Y187 | YRG-2 |
| PJ69-2A |
表2. 作製できるライブラリープレート数の目安
| 製品コード | 容量 | 15 cmライブラリープレート | 10 cmライブラリープレート |
|---|---|---|---|
| 630463 | 250 mg | 300枚分 | 600枚分 |
保存
－20℃
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
