組換えレンチウイルスは現在、第3または第4世代が研究用に使用されている。これらはキャプシドタンパク質(p24)、核キャプシドタンパク質(p6とp7)、マトリクスタンパク質(p17)の4つの遺伝子をコードする
gag遺伝子を共通に保持している。Lenti-X p24 Rapid Titer Kitは、ウイルス上清を用いてp24タンパク質量を測定するためのキットである。キャプシド(殻)中に存在するp24タンパク質(図1)の濃度は、レンチウイルスの実際のタイターと相関している。
図1. レンチウイルス粒子
p24タンパク質はHIV-1 gag遺伝子がコードする4つの遺伝子のうちの一つから作られ、レンチウイルスのキャプシド(殻)中に存在する。
使用方法
上清中の組換えレンチウイルスを添付のバッファーで溶解し、p24タンパク質を含んだサンプルを調製する。サンプルを96ウェルフォーマット(分割可能な8連ウェル×12、抗p24マウス抗体をコート済み)の各ウェルに加え、p24タンパク質を抗体に結合させる。
結合しなかったライセートを洗い流し、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬でp24タンパク質の濃度を測定する(図2)。本キットにはp24タンパク質が陽性コントロールとして含まれており、検量線の作成、サンプルのウイルス濃度の算出に使用できる。
図2. Lenti-X p24 Rapid Titer Kitの操作の流れ
培養上清中のレンチウイルスを溶解してp24タンパク質を調製し、抗p24マウス抗体をコート済みのウェルに加え、一次抗体に結合させる。さらにビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬を加えて、p24タンパク質を検出する。