- 培養上清中のレンチウイルス力価を測定
- 簡便なELISA法、HRP-発色試薬で測定
製品選択ガイド（English）
レンチウイルスp24タンパク質
組換えレンチウイルスは現在、第3または第4世代が研究用に使用されている。これらはキャプシドタンパク質（p24）、核キャプシドタンパク質（p6とp7）、マトリクスタンパク質（p17）の4つの遺伝子をコードするgag遺伝子を共通に保持している。Lenti-X p24 Rapid Titer Kitは、ウイルス上清を用いてp24タンパク質量を測定するためのキットである。キャプシド（殻）中に存在するp24タンパク質（図1）の濃度は、レンチウイルスの実際のタイターと相関している。
図1. レンチウイルス粒子
p24タンパク質はHIV-1 gag遺伝子がコードする4つの遺伝子のうちの一つから作られ、レンチウイルスのキャプシド（殻）中に存在する。
結合しなかったライセートを洗い流し、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬でp24タンパク質の濃度を測定する（図2）。本キットにはp24タンパク質が陽性コントロールとして含まれており、検量線の作成、サンプルのウイルス濃度の算出に使用できる。
図2. Lenti-X p24 Rapid Titer Kitの操作の流れ
培養上清中のレンチウイルスを溶解してp24タンパク質を調製し、抗p24マウス抗体をコート済みのウェルに加え、一次抗体に結合させる。さらにビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬を加えて、p24タンパク質を検出する。
図1. レンチウイルス粒子
p24タンパク質はHIV-1 gag遺伝子がコードする4つの遺伝子のうちの一つから作られ、レンチウイルスのキャプシド（殻）中に存在する。
使用方法
上清中の組換えレンチウイルスを添付のバッファーで溶解し、p24タンパク質を含んだサンプルを調製する。サンプルを96ウェルフォーマット（分割可能な8連ウェル×12、抗p24マウス抗体をコート済み）の各ウェルに加え、p24タンパク質を抗体に結合させる。結合しなかったライセートを洗い流し、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬でp24タンパク質の濃度を測定する（図2）。本キットにはp24タンパク質が陽性コントロールとして含まれており、検量線の作成、サンプルのウイルス濃度の算出に使用できる。
図2. Lenti-X p24 Rapid Titer Kitの操作の流れ
培養上清中のレンチウイルスを溶解してp24タンパク質を調製し、抗p24マウス抗体をコート済みのウェルに加え、一次抗体に結合させる。さらにビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-HRP、発色試薬を加えて、p24タンパク質を検出する。
内容
・Anti-p24 Coated Plate (96 wells×1)
・p24 Control (10 ng/ml) 100 μl
・Lysis Buffer 6 ml
・Anti-p24 (Biotin Conjugate) 12 ml
・Streptavidin HRP 12 ml
・Wash Buffer (20×concentrate) 120 ml
・TMB Substrate 12 ml
・Stop Solution 12 ml
・p24 Control (10 ng/ml) 100 μl
・Lysis Buffer 6 ml
・Anti-p24 (Biotin Conjugate) 12 ml
・Streptavidin HRP 12 ml
・Wash Buffer (20×concentrate) 120 ml
・TMB Substrate 12 ml
・Stop Solution 12 ml
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