Human Mitochondrial DNA (mtDNA) Monitoring Primer Set

Human Mitochondrial DNA (mtDNA) Monitoring Primer Setは、リアルタイムPCRを利用してヒトのミトコンドリアDNA（mtDNA）コピー数を核DNA（nDNA）を基準として相対的に測定するためのプライマーセットである。本製品にはmtDNAとnDNAを検出するためのプライマーペアがそれぞれ2種類、合計4種類含まれている。各プライマーはPseudogenes（偽遺伝子）を増幅しないように設計されている。また、マウス由来のDNAは増幅しないように設計されているので、iPS細胞のようにマウス由来のフィーダー細胞を用いる場合においても問題なく使用できる。
本製品では、1サンプルに対して4種類のプライマーペアを使用してリアルタイムPCRを行い、得られたmtDNAとnDNAのCt値の差より、mtDNAのコピー数を相対定量にて算出する。本製品を使用することにより、iPS細胞等の多能性細胞から肝細胞などへの分化・誘導過程で変動するmtDNAコピー数を簡単にモニタリングできる。

本製品に含まれる各プライマーペアは、MightyAmp for Real Time (TB Green Plus)（製品コード R075A/B）およびTB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR820S/A/B）で良好に反応することを確認している。

解析には、Microsoft Office Excelで作成されたmtDNAコピー数算出用のファイルが利用できます。以下からダウンロードしてご利用ください。
mtDNA_Copy_Number_Calculation（ZIP 9.0 K）

（各プライマー　　50反応分）

1．	ND1 Primer Mix (10 μM each)＊1	50 μl
2．	SLCO2B1 Primer Mix (10 μM each)＊2	50 μl
3．	ND5 Primer Mix (10 μM each)＊1	50 μl
4．	SERPINA1 Primer Mix (10 μM each)＊2	50 μl

＊1 ミトコンドリアDNA(mtDNA)用プライマー
＊2 核DNA(nDNA)用プライマー

－20℃

※	適切に保存し、受取り後1年を目途に使用する。
※	短期間（～1ヵ月）に繰り返し使用する場合には4℃で保存する。ただし、本製品は防腐剤を含んでいないので、コンタミネーションには十分に注意する。

【試薬】

• NucleoSpin Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250）
• MightyAmp for Real Time (TB Green Plus)（製品コード R075A/B）または
  TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR820S/A/B）
  

【機器】

• リアルタイムPCR装置^＊1
  Thermal Cycler Dice Real Time System III（製品コード TP950/TP970/TP980）
  Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
  Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700/TP760：終売）
  
  ＊1 Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）を使用の場合、Baselineがフラットになるように、必要に応じてAuto設定を解除し、ThresholdをManualで設定する必要がある。
• 分光光度計

【器具】

• 各種マイクロピペット
• マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付）
• 0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ600）
• 0.1 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ902)
チューブ1本ごとにフラットキャップが付いているキャップ付き8連チューブです。
NJ600はThermal Cycler Dice Real Time System IIおよびLite（終売）専用、
NJ902はThermal Cycler Dice Real Time System III専用として販売しています。
チューブ間のコンタミネーションの危険性が軽減できるので特にお勧めします。