CultiLife™ Culture bag

1．インジェクションポート

1. インジェクションポートを70％エタノール消毒綿にて消毒する。
2. シリンジ（≧10 ml）を用いて培地を注入する。ゲージ針（20ゲージなど）を利用すると、簡単に培地が注入できる。
   

   
   

2．メス口およびオス口 ルアーポート

1. バッグの接続（図2）
   • 細胞懸濁液を含むバッグはチューブを使って新しいバッグと連結する。
   • チューブは無菌接合装置を用いて接続する。
     この方法によって、必要量の培地を添加することができる。
     

     
     

2. 漏斗によるバッグへの培地注入（図3）
   注意：この操作は無菌性を保つために安全キャビネット内にて行う。
   • 大容量のシリンジ（≧50 ml）をつなぎ漏斗として、バッグのメス口ルアーポートに接続する。
   • 培地をピペットでシリンジに注入する。
   • 注入後、チューブシーラーを用いてバッグとシリンジを切り離す。
     

     
     

1. 市販のY型連結管を利用してCultiLife 215 Culture bagと、空のGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bag、新鮮培地（～3 L）が入ったバッグを接続する。
2. あらかじめCultilIfe 215 Culture bagと新鮮培地を含むバッグのチューブをヘモスタット等でクリップしておく。
3. CultiLife 215 Culture bag内の細胞懸濁液をGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに移す。
4. GT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagにつながるチューブをクリップする。
5. 新鮮培地を含むバッグへのチューブのクリップをはずし、100～200 mlの新鮮培地をCultiLife 215 Culture bagに注入し、再びクリップする。
6. CultiLife 215 Culture bag内をリンスする。
7. GT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagにつながるチューブのクリップをはずし、CultiLife 215 Culture bagをリンスした液をGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに移す。
8. CultiLife 215 Culture bagへつながるチューブをクリップする。
9. GT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに新鮮培地を注入し、最終容量1 Lの液量にする。
10. CultiLife 215 Culture bagを切り離し、新しいGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagをそのチューブに接続する。
    注意：はずしたCultiLife 215 Culture bagに細胞が残っていないか顕微鏡で確認する。もし多くの細胞が残っているようなら、Step5～8を繰り返す。
11. 新しいGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに、もとのGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに含まれる200 mlの細胞懸濁液と300 mlの新鮮培地を添加し、最終容量500 mlとする。
    1. 新鮮培地を含むバッグへつながるチューブをクリップする。
    2. 新しいGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagのチューブのクリップをはずし、200 mlの細胞懸濁液をもとのバッグから新しいバッグを移す。
    3. もとのバッグへつながるチューブをクリップする。
    4. 新鮮培地を含むバッグへつながるチューブのクリップをはずし、300 mlの新鮮培地を加える。
    5. 新鮮培地を含むバッグへつながるチューブをクリップする。
    6. 500 mlの細胞懸濁液を含むGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagを切り離す。
12. 新しいGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagを接続し、Step11を繰り返す。
13. Step12を2回以上繰り返す。
14. 300 mlの新鮮培地をStep3のもとのGT-T610 (CultiLife Eva) Culture bagに加える。
15. Step13のバッグの接続をはずし、シールする。
16. インキュベーターにバッグを設置する。（図4）
    注意：ガス交換の妨げになるので、バッグは重ねずに置いて下さい。