NucleoSpin^® Gel and PCR Clean-up Midi/Maxi

NucleoSpin Gel and PCR Clean-up Midi/Maxiは、大容量のPCR反応液、アガロースゲルからのDNA断片精製に利用できるキットである。Midiでは4 mlまでのPCR反応液、4 gまでのアガロースゲル、Maxiでは10 mlまでのPCR反応液、10 gまでのアガロースゲルを処理できる。本製品では、Binding Buffer NTIにより、PCR反応液とアガロースゲルからのDNA断片精製に対応できる。このBufferにはpH indicatorが含まれており、サンプルと混合した溶液の色により、その溶液のpHがDNAのカラム結合に適しているかどうかを容易に確認できる。
PCR反応液などの酵素反応液からのDNA精製では、酵素、ヌクレオチド、塩類、その他不純物を迅速、簡単に除くことができる。
PCR産物の精製はPCR反応液にBuffer NTIを加え、アガロースゲルからのDNA抽出では、ゲルをBuffer NTI中で溶解させる。その後、溶液の色を確認して、NucleoSpin Gel and PCR Clean-up Midi/Maxiカラムへアプライする。エタノールを添加したBuffer NT3でカラムを洗浄し、不純物をカラムから除去した後、精製DNAはElution Buffer NE（5 mM Tris-HCl、pH8.5）で抽出される。

原理	シリカメンブレン法
形状	Midiスピンカラム	Maxiスピンカラム
サンプル量	＜4 ml　PCR反応液 　　　 ＜4 g　TAE/TBEアガロースゲル	＜10 ml　PCR反応液 　　　 ＜10 g　TAE/TBEアガロースゲル
精製サイズ	50 bp～20 kb
回収率	70～95％
A260/280	1.75～1.85
溶出液量	200～400 μl	1000 μl
精製時間	25分	30分
結合容量	75 μg	250 μg

PCR反応液またはゲルとBinding Buffer NTIを混合した溶液において、カラム結合のための至適pHは5～6である。Binding Buffer NTIにはpH indicatorが含まれているため、溶液の色によって至適pHかどうかをチェックできる。至適pHでない場合、Buffer NTIまたは4M 酢酸ナトリウム（NaAc、pH5.0）または少量HClを溶液が黄色になるまで加える。

yellow, pH＜6	green, pH＜6～7	blue, pH＞7
サンプルのpHが至適	サンプルのpHが少し高い →pH調整が必要	サンプルのpHが高い →pH調整が必要

・Binding Buffer NTI
・Wash Buffer NT3 (Concentrate)
・Elution Buffer NE^＊
・NucleoSpin PCR and Gel Clean-up Midi Columns
　またはNucleoSpin PCR and Gel Clean-up Maxi Columns

* 組成：5 mM Tris-HCl、pH8.5

試薬
・96～100％エタノール

器具
・15 ml　遠心チューブ（Midiの場合）、または50 ml　遠心チューブ（Maxiの場合）
・ピペットチップ（滅菌済）
・ピペット
・高速遠心器
・ヒートブロック

室温

NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。