レンチウイルスベクター作製

iCELLis™ バイオリアクターを用いたウイルスベクター大量製造のプロセス開発

CAR-T細胞治療や遺伝子導入造血幹細胞治療といったex vivo遺伝子治療では、目的遺伝子を細胞に導入するためにレンチウイルスベクターやレトロウイルスベクターが汎用されています。
Cytiva社のiCELLisバイオリアクターは、小さな短冊状の不織布繊維が多数充填された一定の大きさの空間(Fixed-Bed)内でウイルス産生用細胞を培養することができます。これにより、省スペースを実現しつつ、多段式フラスコを上回る培養面積を確保できるため、大量のウイルスベクターを含んだ培養上清液の回収が可能となります。

プロセス開発から実製造
iCELLis NanoバイオリアクターおよびiCELLis 500+バイオリアクターの固定床サイズによるスケールアップ/スケールダウンのイメージ
図1 iCELLis NanoバイオリアクターおよびiCELLis 500+バイオリアクターの固定床サイズによるスケールアップ/スケールダウンのイメージ(LC:低密度Fixed-Bed、HC:高密度Fixed-Bed)

iCELLisバイオリアクターでは、iCELLis Nanoを使用してプロセス開発(ウイルスベクター産生条件の検討)を実施した後に、iCELLis 500+を使用したウイルスベクター製造に移行することができます。



表1 iCELLis NanoバイオリアクターおよびiCELLis 500+バイオリアクターの構成
iCELLis Nano バイオリアクターおよびiCELLis 500+ バイオリアクターの構成表
お客様が求めるウイルスベクター収量に応じて様々な培養面積のFixed-bedを選択可能です。



開発例1 iCELLis Nanoでのレンチウイルスベクター製造
iCELLis Nanoでのレンチウイルスベクター製造の流れ
  • ホストセル:HEK293T
  • ベクター:弊社臨床試験用ベクター
  • GOI:ZsGreen
  • トランスフェクション試薬:PEIpro®(Polyplus社)
  • 培養面積:0.53 m2(Low compaction Fixed-bed, Height: 2 cm)
  Nano 500+予測値
Surface area (cm2) 5,300 3,330,000
ウイルスコピー数(copies/ml) 2.52×109
ウイルスコピー数(copies/cm2 8.09×108
ウイルスコピー数(total copies) 4.29×1012 2.69×1015
ウイルス力価(IFU/ml) 1.68×107
ウイルス力価(IFU/cm2 5.39×106
ウイルス力価(total IFU) 2.86×1010 1.79×1013
データは、n=2の平均値
iCELLis Nanoでの検討結果から、培養面積比を指標にして、iCELLis 500+を用いて製造した際のウイルスコピー数(total copies)とウイルス力価(total IFU)を予測することが可能です。



開発例2 iCELLis Nanoでのレトロウイルスベクター製造
iCELLis Nanoでのレトロウイルスベクター製造の流れ
  • レトロウイルス産生細胞:PG13
  • ベクター:弊社臨床研究用ベクター
  • GOI:ZsGreen
  • 培養面積:0.53 m2(Low compaction Fixed-bed, Height: 2 cm)
  Nano 500+予測値
Surface area (cm2) 5,300 3,330,000
ウイルスコピー数(copies/ml) 1.18×1010
ウイルスコピー数(copies/cm2 3.79×109
ウイルスコピー数(total copies) 2.01×1013 1.26×1016
ウイルス力価(IFU/ml) 3.48×106
ウイルス力価(IFU/cm2 1.10×106
ウイルス力価(total IFU) 5.85×109 3.67×1012
データは、n=2の平均値
タカラバイオでは、iCELLis NanoおよびiCELLis 500+の両機器を備えており、ウイルスベクター大量製造プロセス開発および製造をサポートいたします。


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iCellis is a trademarks of Global Life Sciences Solutions USA LLC or an affiliate doing business as Cytiva.

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