レンチウイルスベクター作製

※タカラバイオWEB会員でご希望の方には、再生／細胞医療・遺伝子治療サービスにかかわる様々な情報が満載の「再生／細胞医療・遺伝子治療サービスMail News」をお届けします。

• タカラバイオ製品のpLVSINベクター、pLVproベクター、pLVpro2ベクターをご利用いただけます
• 用途に応じて、複数の精製グレードから選択可能です。
• 安定発現細胞作製も承ります

1. 初代培養細胞、幹細胞、神経細胞、非分裂細胞を含むあらゆる細胞種に遺伝子導入できる。
2. 安定な遺伝子導入細胞株を得ることができる。
3. ヒト、マウスおよびラットを含む多くの動物細胞に遺伝子導入できる。
4. 動物個体に直接遺伝子導入できる。

• pLVSINベクター
  3'LTR/ΔU3のSIN型ベクターであるため、P2実験施設で使用可能です。
  mRNAを安定化するWPRE配列、ウイルスゲノムの核移行や宿主染色体への組換え効率を高めるcPPT配列などにより、高力価レンチウイルスの産生および導入遺伝子の発現レベルが向上したベクターです。
  Packaging MixはTatタンパク質発現プラスミドを含む「Lentiviral High Titer Packaging Mix」を用います。
  
• pLVpro／pLVpro2ベクター
  pLVpro、pLVpro2ベクターには、いずれもTatタンパク質発現プラスミドを含まない「LVpro Packaging Mix」を用います。
  
  pLVproベクターは、pLVSINの5’LTRのU3領域をCMVプロモーターに置き換えたHIV-1 Tat非依存性の第三世代レンチウイルスベクターです（下図 ポイント①）。P2実験施設で使用可能です。
  pLVSINからHIV-1由来の配列を削減し（下図 ポイント②）、さらに安全性を高め（下図 ポイント③）、高力価のレンチウイルスベクター調製のためにパッケージングシステムを最適化したベクターです。コンポーネントが減った分、搭載可能な目的遺伝子の長さが5 kb（推奨）まで増えました。
  
  
  
  pLVpro2ベクターは、pLVproからさらに安全性と性能を向上させた最新ベクターです。 新たに2種類のプロモーターラインナップを追加しました（下図ポイント④）。pLVproベクターからHIV-1由来の配列をさらに削減し、力価と安全性を高めました（下図ポイント⑤） 。3’LTR下流にpolyA付加配列を挿入することで、力価をさらに高めました（下図ポイント⑥）。
  

プラスミドDNA調製

• 目的遺伝子を挿入した発現プラスミドDNA（pLV-GOIベクター）^＊1を作製し、挿入遺伝子のサイズ^＊2、挿入接続部位の塩基配列を確認後、大量調製します。
  ＊1 pLVSINシリーズ、pLVproシリーズ、pLVpro2シリーズを使用
  ＊2 pLVSINベクターに挿入可能な遺伝子長は4.5 kBまで、pLVpro/pLVpro2ベクターに挿入可能な遺伝子長は5 kBまで

ウイルスベクターの簡易濃縮（約100倍まで）

薬剤耐性コロニー検出法による力価測定

• 薬剤による選択後、薬剤耐性コロニーを検出し、感染力価を測定
  ※ネオマイシン耐性コロニー検出法の標的細胞には、ヒトHT1080細胞を使用いたします。ウイルス力価として得られる数値は、ウイルス液1 mlあたりのネオマイシン耐性コロニー形成能を示します（Neomycin colony forming unit/ml）。

レンチウイルスベクターによる遺伝子安定発現細胞株作製

• 標的細胞のセットアップ、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入
• 薬剤耐性となった目的遺伝子導入プール細胞の調製
• リアルタイムPCRによる目的遺伝子の発現確認

• プラスミドDNA調製
• 参考納期：＋8週間～
• 参考価格：￥170,000～／件　(遺伝子長で変動いたします)
• ウイルスベクターの簡易濃縮
• 薬剤耐性コロニー検出法による力価測定
• レンチウイルスベクターによる安定発現細胞作製
• 参考納期：＋8週間～
• 参考価格：お問い合わせください
• 計画書作成、報告書作成

• 精製レンチウイルスベクター液
• サービスレポート
• 【オプションサービス】　調製したプラスミドDNA

• 以下のフォーマットにご記入のうえ、電子メールにてこちらへご送付ください。
  
  • ウイルスベクター作製受託依頼書（Excel）
• 以下の手続きの後に実際のサービスを開始します。
  
  1. 挿入遺伝子に関する情報を開示ください。 ＜ 遺伝子情報書式用紙 ver.7 ＞
     タカラバイオの遺伝子組換え実験安全委員会への申請に必要な情報（遺伝子産物の性質、塩基配列等）をお知らせいただきます。
     電子ファイルに必要事項をご記載後、メールでお送りください。
     なお、メール送信の際には情報漏洩に充分ご注意ください。（弊社では責任を負いかねます）
     情報の扱いには十分注意を払っております。また、情報開示にあたり、秘密保持契約を必要とされる場合はご用意いたします。
  2. タカラバイオの安全委員会において、開示いただいた遺伝子情報をもとに、必要とされる物理的封じ込めレベルを判断し、折り返しご連絡させていただきます。
     P2レベル以下で扱うことができない遺伝子の場合、サービスをお断りすることになります。

• 本作業で作製したレンチウイルスベクターを商業目的で使用される場合には、個別にライセンス契約の締結が必要となる場合があります。
• レンチウイルスベクターの取り扱いは、挿入されている遺伝子の全塩基配列が既知で、かつ、その遺伝子が毒性あるいは病原性等を示さず安全であると判断できる場合に限りP2レベルで扱うことができます。本サービスでは、P2レベルで扱うことのできる場合のみ、ご依頼をお受けしています。
• お客様よりご提供いただいたサンプル・情報および納品物の複製物は、別途期限を定めている場合を除き、業務終了後3ヵ月を経過すると順次廃棄いたします。ご了承ください。