TaKaRa Ex Taq® HSとAMV RTaseを用いた2ステップRT-PCR用キット

TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
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ベクター情報
参考
資料
TKR RR019A RR019A TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0
  • バルクなど特別対応可能
100回 ¥48,000
説明書・データシート・ベクター情報
TKR RR019B(A×2) RR019B(A×2) TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0
  • バルクなど特別対応可能
100回×2 ¥92,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットである。AMV(Avian Myeloblastosis Virus)由来の逆転写酵素AMV RTase XLによるRNAからのcDNA合成、およびTaKaRa Ex Taq HS によるcDNAを鋳型としたPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。本製品には、RNAからのcDNA合成およびcDNAのPCR増幅に必要なすべての試薬が含まれている。AMV RTase XLは、反応温度を高く設定することが可能なため(42~60℃)、長鎖のcDNA合成だけでなく複雑な二次構造を取りやすいRNAの逆転写反応にも有効である。PCR増幅のためのTaKaRa Ex Taq HSは、Hot Start PCR用の酵素であるため、反応液調製時のミスアニーリングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、特異性の高いPCR増幅が可能である。Oligo dT-Adaptor Primerは、polyARNAの3'末端からのcDNA合成をさらに効率良く行えるよう工夫されている。これにより、3'-RACE法による未知の3'末端の増幅を効率良く行うことが可能である。

内容

(100回分)*1
AMV Reverse Transcriptase XL(5 U/μl)*2 50 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4 (20μM) 50 μl
10×RT Buffer*3 1 ml
5×PCR Buffer 1 ml
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control F-1 Primer (20 pmol/μl)*4 25 μl
Control R-1 Primer (20 pmol/μl)*5 25 μl
Positive Control RNA (2×105 copies/μl)*6 25 μl


*1 [ 10 μl逆転写反応→50 μl PCR反応 ]の100回分
*2 Life Sciences Advanced Technologies社で製造されたものです。
*3 100 mM Tris-HCl (pH8.3)、500 mM KCl
*4 Positive Control RNA用上流プライマー
*5 Positive Control RNA用下流プライマー
*6 pSPTet3プラスミドの転写polyA RNA

保存

-20℃

特長

RNAテンプレート 全般
増幅サイズ 少なくとも5 kb程度までは増幅可能
逆転写酵素 AMV Reverse Transcriptase XL(42~60℃で逆転写可能)
DNA Polymerase TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor 必要(キットに含まれる)
1st strand cDNA合成用プライマー Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、特異的下流プライマーより選択可
3'-RACE法 RT時にOligo dT-Adaptor Primer、PCR時にM13 M4 Primerを使用することにより、3'-RACE法に対応
操作 1本のチューブ内で反応可。熱処理により逆転写酵素活性を失活させた後、PCR反応を行う。


TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver. 3.0は、AMV Reverse Transcriptase XLによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内でTaKaRa Ex Taq HSによるPCR増幅を行う。 RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、あるいはcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー(特異的下流プライマー)を用いることができる。 3'-RACE法を行う際はOligo dT-Adaptor Primerを用いる。

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