Taq抗体と結合させたTaKaRa LA Taq®

TaKaRa LA Taq® Hot Start Version

  • ●反応用バッファー添付+dNTP
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR RR042A RR042A TaKaRa LA Taq® Hot Start Version
  • バルクなど特別対応可能
125 U ¥29,000
説明書・データシート・ベクター情報
TKR RR042B(A×4) RR042B(A×4) TaKaRa LA Taq® Hot Start Version
  • バルクなど特別対応可能
500 U ¥93,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

TaKaRa LA Taqは、LA PCRの原理を応用した3’→5’exonuclease活性(proof reading活性)を持つ耐熱性DNA Polymeraseである。通常のPCR条件下において、従来のTaq DNA Polymeraseと比べて高い増幅効率が期待でき、基本的にどのような鋳型DNAにも適用できるが、特に15 kb以上の増幅には効果的である。
本製品に使用しているTaKaRa LA Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa LA Taqを混合したもので、ホットスタートPCR用の酵素である。 高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体はPCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、特別な変性ステップは必要なく、従来のPCR条件で使用できる。

内容

(125 U)
TaKaRa LA Taq HS (5 U/μl)25 μl
10×LA PCR Buffer II (Mg2+ plus)1 ml
dNTP Mixture (各2.5 mM)400 μl

保存

-20℃

形状

20 mMTris-HCl 緩衝液(pH8.0)
100 mMKCl
0.1 mMEDTA
1 mMDTT
0.5%Tween 20
0.5%Nonidet P-40
50%Glycerol

添付10×LA PCR Buffer II(Mg2+ plus)

包装単位1 ml
Mg2+濃度(10×)25 mM
保存-20℃

添付dNTP Mixture*

濃度各2.5 mM
形状水溶液(ナトリウム塩)pH7~9
純度各98%以上

* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。

活性の定義

活性化サケ精子DNAを鋳型/プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

25 mMTAPS Buffer (pH9.3、25℃)
50 mMKCl
2 mMMgCl2
0.1 mMDTT
各200 μMdATP・dGTP・dCTP
100 μM[3H]dTTP
0.25 mg/ml活性化サケ精子DNA

純度

●10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物を74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

用途

Hot Start PCR法によるDNA増幅、特に長鎖の増幅に最適。

PCR産物について

TaKaRa LA Taq HS を用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3'末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector[pMD20(製品コード 3270)、pMD19 (Simple)(製品コード 3271)など]にクローニングすることができる。ただし、長鎖のPCR産物(5 kb以上)のT-Vectorへのクローニングは効率がかなり悪くなる。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。

品質検定

●λ DNAを鋳型としたPCR反応(増幅産物 35 kb)において良好な増幅が見られることを確認している。
●ヒトゲノム DNAを鋳型としたPCR反応(増幅産物 17.5 kb)において良好な増幅が見られることを確認している
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  用途に応じて選択してください。
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