Cloned

T4 DNA Polymerase

  • ●反応用バッファー添付
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR 2040A 2040A T4 DNA Polymerase
  • 修飾酵素、逆転写酵素 サマーキャンペーン
  • バルクなど特別対応可能
100 U ¥13,500
¥10,125
2017/07/03~
2017/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2040B(A×5) 2040B(A×5) T4 DNA Polymerase
  • 修飾酵素、逆転写酵素 サマーキャンペーン
  • バルクなど特別対応可能
500 U ¥52,000
¥39,000
2017/07/03~
2017/08/31

説明書・データシート・ベクター情報

※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。

製品説明

本酵素は、鋳型DNA、プライマー存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する酵素である。本酵素は、Klenow Fragmentに比べて、約100~1,000倍強い一本鎖DNA特異的 3’→5’exonuclease活性が含まれているが、5’→3’exonuclease活性は持たない。

保存

-20℃

濃度

2~5 U/μl

形状

200 mMリン酸カリウム緩衝液(pH6.5)
1 mM DTT
50%グリセロール

添付Buffer組成(10×)

330 mMTris-acetate(pH7.9)
660 mMCH3COOK
100 mM(CH3COO)2Mg
5 mMDTT
0.1%BSA[別添付]

活性の定義

熱変性仔牛胸腺DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH8.8において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

67 mMTris-HCl(pH8.8)
6.7 mMMgCl2
16.6 mM(NH4)2SO4
1 mMDTT
6.7 μMEDTA
0.0167%ウシ血清アルブミン
0.2 mg/ ml基質DNA
各330 μMdCTP、dATP、dGTP
330 μM[3H]dTTP

純度

2 Uの本酵素と1 μgのclosed circular(RF I)pBR322 DNAとを37℃、16時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

使用上の注意

  • pH7.5およびpH9.7では50%の活性となる2)
  • 活性の発現にMg2+を要求し、最大活性のためにはSH還元剤を要求する1)
  • 反応系全体のイオン強度が100 mMを超えると阻害される2)
  • 10×添付Bufferに0.1%ウシ血清アルブミンを直接加えると多量の白沈が生じるので、反応液を調製する際は次の順番で試薬を加える。
      dH2O→10×添付Buffer→0.1% BSA→基質DNA

用途

  • DNAフラグメント末端の平滑化4)
  • 3’→5’exonuclease活性を利用した、replacement synthesisによるDNAフラグメントの3’末端からの標識3, 6)

起源

Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene

一般的性質

  • 分子量
    114,000
  • サブユニット
    単純ポリペプチド
    15個のシステイン残基を持ち、活性に必須
  • 至適pH
    pH8~9(Trisまたはglycine buffer)
    pH7.5またはpH9.7では50%の活性
  • 補因子
    Mg2+ (至適濃度:6 mM)、Mn2+(至適濃度:0.1 mM、6 mM Mg2+のときの1/4)、SH試薬(2-メルカプトエタノール、DTT等)
  • 活性化剤
    Polymerase活性は、T4 gene 32産物により特異的に顕著な活性の増大を示すが、exonuclease活性は飽和量のT4 gene 32産物により完全に阻害される。
  • 阻害剤
    NEM
  • 安定性
    vortex等の激しい撹拌により失活する。
  • 至適塩濃度
    100 mM(高すぎると阻害、200 mMで50 mMの5%)
  • polymerase活性とexonuclease活性の関係
    次の3つの条件が揃うとpolymerase活性を示す。
        1.鋳型
        2.鋳型より少なくとも1塩基は短い3'-OH末端のプライマー
        3.鋳型に相補的なdNTP
    このうち1つでも欠けるとexonucleaseとして働く。

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