TaKaRa 炭疽菌 PCR Detection Kit

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR RR027 RR027 TaKaRa 炭疽菌 PCR Detection Kit
  • バルクなど特別対応可能
PA, CAP同時検出48回 ¥73,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

炭疽菌は、芽胞を形成する好気性グラム陽性桿菌であり、その病原性は、2種類の毒性プラスミド(pX01、pX02)によるものである。pX01プラスミドは3種類の毒素成分(PA: protective antigen, LF: lethal factor, EF: edema factor)をコードしている。一方、pX02プラスミドは莢膜合成に関係する遺伝子(capA, capB, capC)をコードしている。これら2種類の毒性プラスミドの両方を保持する場合に病原性を示す。
TaKaRa 炭疽菌 PCR Detection Kitは、pX01プラスミドに含まれるPA遺伝子およびpX02プラスミドに含まれるcapA遺伝子をPCR法により一本の反応チューブで同時に増幅し、アガロースゲル電気泳動により検出するためのキットである。増幅にはHot Start用酵素(TaKaRa Ex Taq HS)を使用しているので、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、高感度の検出が可能となっている。また本キットにはインターナルコントロールが含まれているため、偽陰性をモニターすることができる。

本キットは短時間での検出が可能な簡易検出キットです。炭疽菌であることの最終判断は、本キットの判定結果からだけでなく、グラム染色などを含めた一般的な微生物学的手法による判定結果とあわせて行ってください。
なお、本キットの製品化にあたり、帯広畜産大学畜産学部獣医学科 牧野壮一先生にご協力をいただきました。

内容

(48回分)
TaKaRa Ex Taq HS(5 units/μl)12.5 μl
5×Reaction Mixture*1500 μl
PA Primers(PA7, PA6)(各10μM)200 μl
CAP Primers(M011, M012)(各10μM)200 μl
100 bp DNA Ladder(650 ng/5μl)50 μl
6×Loading buffer*260 μl


*1 dNTP Mixture、Internal Control を含む。
*2 36% グリセロール、30 mM EDTA、0.05% Bromophenol Blue、0.05% キシレンシアノール

保存

-20℃

プライマー配列と増幅サイズ


プライマー名 配列 ターゲット
増幅サイズ
インターナルコントロール
増幅サイズ
PA Primers PA7 5'- ATCAC CAGAG GCAAG ACACC C -3' 211 bp 409 bp
PA6 5'- ACCAA TATCA AAGAA CGACG C -3'
CAP Primers MO11 5'- GACGG ATTAT GGTGC TAAG -3' 591 bp 98 bp
MO12 5'- GCACT GGCAA CTGGT TTTG -3'

キット以外に必要な試薬、機器(主なもの)

本キットを用いた検出過程では、さらに次のような試薬、機器を必要とする。
【試薬】
1. 滅菌精製水
2. PrimeGel Agarose PCR-Sieve(製品コード 5810A)
3. 電気泳動用buffer [TBE (Tris-Borate-EDTA) Buffer powder(製品コード T905)など]
4. DNA染色剤 [SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain(製品コード 5760A/5761A)、またはエチジウムブロマイド]
【機器】
1. サーマルサイクラー
  [TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch(製品コード TP350)]
  [TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient (製品コード TP600)]
2. 電気泳動装置
  Mupid-2plus(製品コード M-2P)
  Mupid-exU(製品コード EXU-1)
  Mupid-One(製品コード O1-01)など
3. 電気泳動ゲル撮影用装置(SYBR Green Iを使用する場合は専用のフィルターが必要です。)
4. UVトランスイルミネーター(300 nm前後のもの)
5. 電気泳動ゲル撮影用ポラロイドカメラ (SYBR Green Iを使用される場合は専用のフィルターが必要です。)
6. ヒートブロック(95℃まで温度を上げられるもの)
7. 1.5 mlチューブ対応型冷却遠心機
【その他】
1. 0.2 ml PCR tube[0.2 ml Hi-Tube Dome Cap (製品コード NJ200)]など
2. マイクロピペット
3. マイクロピペット用チップ(疎水性フィルター付き)
4. ポラロイドフィルム
5. アガロースゲル染色用トレイ(SYBR Green Iを使用される場合は、ポリプロピレン製容器を使用してください。)

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