EpiScope MSP KitはMSP（Methylation Specific PCR、メチル化特異的PCR）解析専用のPCR試薬である。MSP解析では、バイサルファイト処理によりCpG配列のメチル化状態に応じて配列が変わる塩基部位に、メチル化DNA検出用プライマー（M Primer）と非メチル化DNA検出用プライマー（UM Primer）を設計してPCRを行い、増幅の有無によりメチル化または非メチル化を識別する。
本製品は、MSP用の専用酵素と最適化された組成のバッファーにより、バイサルファイト処理されたウラシルを含むDNAを鋳型として、従来のPCR試薬と比較してDNAメチル化／非メチル化配列の識別能が大幅に向上したMSP解析を行うことができる。
リアルタイムモニタリングに適した濃度のインターカレーター（TB Green）^*を含んだ状態で反応系が至適化されており、リアルタイムPCR検出（半定量的な解析も可能）、エンドポイント検出（電気泳動で増幅を確認）の両方を同じ反応条件で行うことができる。

* タカラバイオでは、インターカレーター法のリアルタイムPCR（qPCR）試薬の製品名、コンポーネント名を2017年10月下旬より順次、「TB Greenシリーズ」に名称変更いたします。製品コードや試薬の性能に変更はありません。これまで通りご使用ください。

【注意】バイサルファイト処理済みDNAを鋳型として、バイサルファイトシーケンスやCOBRA法のためのPCR増幅を行う場合は、TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)（製品コード R110A/B）の使用を推奨する。

（50 μl反応系、200回）

2×MSP Buffer (Mg2＋ plus, dNTP plus)*1	1 ml×5本
MSP Enzyme	240 μl
TB Green Solution (×100)	100 μl
ROX Reference Dye（50×conc.）*2	200 μl
ROX Reference Dye II（50×conc.）*2	200 μl

*1 Mg^2＋濃度は4 mM（2×）、dNTP濃度は400 μM（2×）。

*2 Applied BiosystemsのリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。

• ROX Reference Dye（50×）を添加する機種
  StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
• ROX Reference Dye II（50×）を添加する機種
  ・Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System
  ・Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
• 添加の必要がない機種
  ・Thermal Cycler Dice Real Time System シリーズ（製品コード TP950/TP900/TP700）など
  ・電気泳動による解析を行う通常のPCR装置

－20℃
TB Green Solution (×100)、ROX Reference Dye、Dye IIは必ず遮光してください。

リアルタイムPCR検出、エンドポイント検出とも同じ反応液組成、PCR条件で反応を行う。エンドポイント検出の場合にも、必ずTB Green Solution (×100)を添加する。

TB Greenは核酸と結合する性質上、変異原性の可能性があるものとして取り扱ってください。また、DMSO溶液のため、組織中に色素が浸透する恐れもありますので、使用に際しては必ず手袋を着用してください。

エピジェネティクス解析フローチャート