リアルタイムPCRで高感度に検出するには、特異的に反応するプライマーを設計することが重要である。以下のガイドラインに沿って設計してください。
増幅産物
| 増幅サイズ | 100－150 bpが最適 | 300 bp程度までなら増幅可能 |
| Tm | 90℃以下 | 高すぎると反応効率が低下する |
プライマー
| 長さ | 17－25 mer | |
| GC含量 | 40－60％ | |
| Tm | 55－65℃ Forward-primerとReverse-primerのTm値が大きく異ならないこと | |
| 配列 | 3'末端にGまたはCが3個以上連続する配列は避ける。 | アニーリングの特異性が低く、プライマーダイマーなど、非特異的産物を生じやすい。 |
| 3'末端がTになる配列は避ける。ミスマッチでもアニールすることがある。 | 特異性が低い。 | |
| 相補性 | プライマー内部に3'末端と一致する配列 (2ベース以上)が含まれるものは避ける。 | プライマーダイマーが生じやすい。 |
| 特異性 | BLASTサーチを行い、プライマーの特異性を確認する。 | http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/ |
設計位置 (リアルタイムRT-PCRの場合)
| Genomic DNAとの区別 | エキソンジャンクションに設計する。 | Genomic DNAを検出しないように、エキソンジャンクションを挟む位置に設計する。 |
| mRNA上での位置 | 逆転写反応にOligo dT Primerを使用する場合には、mRNAの3'末端からできるだけ近い位置に設計する。 |
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
