ウシ、ブタ、ニワトリなどの6肉種を判別
製品説明
本製品は、ミトコンドリアDNA上にあるcytochrome c oxidase subunit I (cox I)遺伝子領域の動物種間の多型をもとにして、原料肉のウシ、ブタ、ニワトリ、ウマ、ヒツジ、ウサギの6種の種判別を行うためのキットで、増幅・検出のためにThermal Cycler Dice Real Time System IVなどのリアルタイムPCR装置を用いて判定を行います。
本製品の増幅にはホットスタートPCR用酵素、TaKaRa Ex Taq HSを使用しているので、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができます。
本製品では、cox I領域においてそれぞれの動物種を特異的に増幅するように設計したプライマーを使用し、さらに、それぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズするFAM標識プローブを用いて検出を行います。この検出にはサイクリングプローブ法を採用しています。
サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、増幅中や増幅後の遺伝子断片の特定配列を効率良く検出することができます。プローブは、RNA部をはさんで一方が蛍光物質で、もう一方がその蛍光物質の発する蛍光を消光する物質（クエンチャー）で標識されています。このプローブは、インタクトな状態ではクエンチングにより強い蛍光を発することはありませんが、増幅産物中の相補的な配列とハイブリッドを形成した後にRNase HによりRNA部分で切断されることにより、強い蛍光を発するようになります。この蛍光強度を測定することで、増幅産物をモニターすることができます。
リアルタイムPCR装置を用いたリアルタイム検出であるため、電気泳動が不要となり迅速に判定結果が得られます（約80分）。また、本製品の反応液には、PCRによる増幅反応が問題なく行われていることを確認するための反応コントロール用の鋳型、プライマーおよび検出用のROX標識プローブが含まれており、阻害物質の混入によるPCR反応の阻害の有無を確認することができます。
本製品の増幅にはホットスタートPCR用酵素、TaKaRa Ex Taq HSを使用しているので、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができます。
本製品では、cox I領域においてそれぞれの動物種を特異的に増幅するように設計したプライマーを使用し、さらに、それぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズするFAM標識プローブを用いて検出を行います。この検出にはサイクリングプローブ法を採用しています。
サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、増幅中や増幅後の遺伝子断片の特定配列を効率良く検出することができます。プローブは、RNA部をはさんで一方が蛍光物質で、もう一方がその蛍光物質の発する蛍光を消光する物質（クエンチャー）で標識されています。このプローブは、インタクトな状態ではクエンチングにより強い蛍光を発することはありませんが、増幅産物中の相補的な配列とハイブリッドを形成した後にRNase HによりRNA部分で切断されることにより、強い蛍光を発するようになります。この蛍光強度を測定することで、増幅産物をモニターすることができます。
リアルタイムPCR装置を用いたリアルタイム検出であるため、電気泳動が不要となり迅速に判定結果が得られます（約80分）。また、本製品の反応液には、PCRによる増幅反応が問題なく行われていることを確認するための反応コントロール用の鋳型、プライマーおよび検出用のROX標識プローブが含まれており、阻害物質の混入によるPCR反応の阻害の有無を確認することができます。
内容
（25 μl反応×120回、各20回×6種）
*1 酵素、Buffer、dNTP mixtureを含みます。
*2 プライマー、プローブ、インターナルコントロールを含みます。蛍光標識プローブにつき、遮光に留意してください。
*3 各Control DNAは、反応性確認用の陽性コントロールです（濃度；約2 ng/μl）。
| 12× CycleavePCR Reaction Mix*1 | 2× | 750 μl×2 (120回分) |
| 2Primer/Probe Mix-1 (for beef) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 3Primer/Probe Mix-2 (for pork) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 4Primer/Probe Mix-3 (for chicken) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 5Primer/Probe Mix-4 (for rabbit) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 6Primer/Probe Mix-5 (for horse meat) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 7Primer/Probe Mix-6 (for mutton) *2 | 5× | 100 μl (20回分) |
| 8dH2O | 1 ml | |
| 9Control DNA for beef*3 | 50 μl (10回分) | |
| 10Control DNA for pork*3 | 50 μl (10回分) | |
| 11Control DNA for chicken*3 | 50 μl (10回分) | |
| 12Control DNA for rabbit*3 | 50 μl (10回分) | |
| 13Control DNA for horse meat*3 | 50 μl (10回分) | |
| 14Control DNA for mutton*3 | 50 μl (10回分) |
*1 酵素、Buffer、dNTP mixtureを含みます。
*2 プライマー、プローブ、インターナルコントロールを含みます。蛍光標識プローブにつき、遮光に留意してください。
*3 各Control DNAは、反応性確認用の陽性コントロールです（濃度；約2 ng/μl）。
保存
－20℃
本製品以外に必要な試薬、機器、器具（主なもの）
【試薬】
DNA抽出試薬 【機器】
リアルタイムPCR装置＊および専用チューブ
【器具】
＊本製品はSmart Cycler II Systemではご使用いただけません。
DNA抽出試薬 【機器】
リアルタイムPCR装置＊および専用チューブ
- Thermal Cycler Dice Real Time System IV with PC（製品コード TP1010）
- Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
- Thermal Cycler Dice Real TIme System Lite（製品コード TP700/TP760：終売）
- Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）など
食品環境検査用ソフトウェア（日本語表示）
またはThermal Cycler Dice Real Time System Software
またはThermal Cycler Dice Real Time System Software
【器具】
- 200 μl、20 μl、10 μl 各マイクロピペット
- マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付）
＊本製品はSmart Cycler II Systemではご使用いただけません。
補足資料
Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意しています。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用してください。
CycleavePCRキットによる定性解析（PDF、989 K）
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用してください。
CycleavePCRキットによる定性解析（PDF、989 K）
BIO VIEW / Clontechniques
Thermal Cycler Dice® Real Time Systemを用いて
ウシ、ブタ、ニワトリ、ウサギ、ウマ、ヒツジの6 肉種を
高感度に判別！！
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- 注意事項
- 本製品は食品分析および環境分析用試薬です。ヒト、動物への医療、臨床診断には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。検査結果判定により発生する問題に関してタカラバイオ株式会社は一切の責任を負いません。
- タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
- タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。 - ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
