はじめに
令和元年9月19日に、厚生労働省医薬・生活衛生局生活衛生課長通知「公衆浴場における浴槽水等のレジオネラ属菌検査方法について」（薬生衛発0919第1号）が発出されました。これは、基準項目の一つであるレジオネラ属菌の具体的な検査方法に言及したもので、従来の培養法に加えて迅速検査法（遺伝子検査法）のLC EMA-qPCR法とリアルタイムPCR法が記載されました。ただし各自治体の条例などでは、公衆浴場のレジオネラ検査は培養法が規定されており、PCR法の結果は補助的に用いられます。
PCR法の特性を有効活用する場としては、清掃・消毒管理後の検水におけるレジオネラ属菌の陰性確認や、平時の汚染の有無や増減を調べるといったスクリーニング検査としての利用が挙げられます。
PCR法の特性を有効活用する場としては、清掃・消毒管理後の検水におけるレジオネラ属菌の陰性確認や、平時の汚染の有無や増減を調べるといったスクリーニング検査としての利用が挙げられます。
LC EMA-qPCR法とは
液体培養（LC：Liquid Culture）による生菌の選択的増殖＊とEMA処理による死菌由来DNAからのPCR増幅の抑制の2つを組み合わせることで、「迅速性」と「生菌選択性」を兼ね備えた遺伝子検査法です。EMA処理のみのPCRに比べ、より選択性が高く、かつ高感度な生菌検出法と考えられます。
＊ MWY液体培地で36℃18時間 培養することで生菌のみが増殖し、相対的に生菌の選択性が向上します。 定量性を保った状態で増菌させ、定量的な解析を行うために、一定時間（18時間）の培養を行います。
＊ MWY液体培地で36℃18時間 培養することで生菌のみが増殖し、相対的に生菌の選択性が向上します。 定量性を保った状態で増菌させ、定量的な解析を行うために、一定時間（18時間）の培養を行います。
レジオネラ属菌検査の流れ
LC EMA-qPCR法によるレジオネラ属菌検出は、2日目に結果判定ができます。1日目は、検水を濃縮し、酸処理を行った後、液体培養を開始します。2日目は、EMA処理を行い、DNA抽出後、リアルタイムPCRによる検出を行います。
LC EMA-qPCR法の試薬フロー
ステップごとにLC EMA-qPCR用試薬をご用意しています。
| ステップ | 関連製品 | |
|---|---|---|
| 1 | 液体培養（LC） | Legionella LC Medium Base Ver.2（製品コード 9017） |
| 2 | EMA処理：EMAの浸透 | Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR（製品コード 7730） |
| EMA処理：光照射 | LED Crosslinker 30（製品コード EM300) LED Crosslinker 12（製品コード EM200：終売) |
|
| 3 | DNA抽出 | Lysis buffer for Legionella Ver2（製品コード 9183） Lysis buffer for Legionella（製品コード 9181） |
| 4 | リアルタイムPCR | CycleavePCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit（製品コード CY240／CY240S） |
| リアルタイムPCR装置 | Thermal Cycler Dice Real Time System IV with PC（製品コード TP1010） | |
| Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC（製品コード TP970） | ||
| Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900、TP960：終売） | ||
| Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700、TP760：終売） | ||
| 参考 | EMA処理の成否チェック | Control Test Kit（Viable Bacteria Selection）（製品コード CY290） |
レジオネラ属菌の遺伝子検査法
| 生菌死菌検出法 （リアルタイムPCR法） | 生菌検出法 LC EMA-qPCR法 | |
| 用途 | 陰性確認 スクリーニング検査 | 生菌の存在確認 スクリーニング検査 |
| 判定所要日数 | 1日 | 2日 |
| 特長 | 死菌の存在履歴から 潜在的な汚染評価 | 液体培養（18時間）と EMA処理の組合せにより 生菌を選択的に検出 |
| 詳細 | 詳しくはこちら | 詳しくは上記を ご覧ください |
※ 「第5版レジオネラ症防止指針」に収載されている「EMA-qPCR法」については、こちらのページをご参照ください。
遺伝子検査の活用事例
- 清掃・消毒管理された検水におけるレジオネラ属菌の陰性を確認する場合
- レジオネラ属菌の存在履歴を確認する場合
- 平板培養法と併用したスクリーニング検査として利用する場合
- レジオネラ症患者発生時における感染源追及のための検査をする場合
製品パンフレット・ハンドブック
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