Universal Buffer・Basal Bufferによる制限酵素活性表示システム

反応液別相対活性

タカラバイオでは、Universal Buffer〔5種 Buffer中1種、■〕で酵素活性を測定し、その値を表示するシステムを採用している。その酵素活性を100％とした際の、各Universal Bufferでの相対活性を以下に記載する。（　）は、Star活性等の影響を受けやすいバッファーを示している。これらの影響を避けるため、なるべく■か■のバッファーを使用することが望ましい。なお、Acc III、Bal I、Bcn I、Bgl I、Bpu1102 I、Cfr10 I、Eam1105 I、Eco52 I、Nru I、PshB I、SnaB I、Ssp I、Taq I 、VpaK11B I（14品目）については、Basal Bufferを使用する。Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる（「Basal Bufferの組成」を参照）。また、Double digestionの参考に、各Universal Buffer別の使用推奨酵素〔反応液別相対活性■および■酵素〕を列挙した。なお、反応温度については酵素ごとに記載している。

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■
添付・活性測定Buffer
■
使用推奨Buffer
制限酵素 相対活性（％）
L M H K T+BSA Basal*1
Aat II <20 <20 <20 <20 100 120
Acc I 20 100 <20 (<20) 160 80
Acc II (260) 100 <20 20 200 160
Acc III (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100
Afa I 60 60 40 60 100 100
Afl II 20 40*2 <20 <20 140 120
Alu I 100 100 <20 40 200 120
Aor13H I <20 20 <20 80*2 80 100
Aor51H I 80 100 <20 20 120 120
Apa I 100 <20 <20 <20 <20 120
ApaL I 100 20 <20 <20 120 120
Bal I <10 <10 <10 <10 <10 100
BamH I (40) (60) 80 100 60 160
Ban II (120) (120) 100 80 (100) 100
BciT130 I (<20) (20) 80 100 (20) 100
Bcn I <20 20 40 60 60 100
Bgl I <20 <20 20 40 <20 100
Bgl II <20 20 100 (100) (60) 100
Bln I <20 20 40 100 40 120
BmeT110 I <20 <20 20 100 <20 140
BmgT120 I <20 <20 100 40 <20 240
Bpu1102 I <20 <20 <20 40 60 100
BspT104 I 100 60 <20 <20 100 120
BspT107 I <20 20 80 100 20 100
Bsp1286 I 100 20 <20 <20 60 100
Bsp1407 I 20 60 20 20 100 100
BssH II 100 100 60 20 140 100
BstP I (<20) (60) 100 (100) (100) 100
BstX I <20 40 100 <20 <20 120
Bst1107 I (<20) 60 100 100 40 100
Cfr10 I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100
Cla I 40 100 60 100 60 100
Cpo I <20 <20 80 100 <20 100
Dde I 40 60 60 100 80 80
Dra I 100 100 60 100 80 80
Dpn I 60 60 120 140 100 100
Eae I 60 100 <20 <20 120 160
Eam1105 I (<20) (40) 20 40 (40) 100
EcoO65 I (20) (60) 60*2 40 40 100
EcoO109 I 100 60 <20 <20 100 160
EcoR I (20) (100) 100 (120) (80) 120
EcoR V (<20) (40) 100 (120) (40) 100
EcoT14 I (<20) (40) 100 120 (60) 100
EcoT22 I <20 20 100 (140) (20) 120
Eco52 I <20 <20 <20 <20 <20 100
Eco81 I <20 100 <20 <20 100 160
Fba I (<20) (<20) (80) 100 (20) 100
Fok I (20) (60)*2 <20 <20 (200) 100
Hae II 80 100 <20 30 (200) 120
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制限酵素 相対活性(％)
L M H K T+BSA Basal*1
Hae III 60 100 100 60 100 100
Hap II 100 60 <20 <20 100 80
Hha I 80 100 150 >300 150 80
Hinc II 20 100 20 40 >240 100
Hind III (60) 100 <10 40 (100) 80
Hinf I 80 100 100 160 60 100
Hin1 I 40 80*2 <20 20 60 160
Hpa I <20 (40) 20 100 (80) 100
Kpn I (100) 40 <20 <20 60 (140)
Mbo I 20 40 60 100 40 100
Mbo II 100 60 <20 <20 60 100
Mfl I 100 80 <20 <20 80 100
Mlu I 60 60 100 (100) 60 100
Msp I 40 40 <20 40 100 60
Mun I (200) 100*2 <20 <20 160 100
Nae I 100 <20 <20 <20 100 120
Nco I (40) (60) 20 20*2 (60) 160
Nde I <20 40 100 (100) 20 100
Nhe I (120) 100 <20 <20 (160) 100
Not I <20 20 100*3 60 (<20) 60
Nru I 0 <20 20 20 <20 100
Nsb I 40 20 <20 60 100 100
PmaC I 100 80 <20 <20 100 100
PshA I 20 40 <20 100 60 160
PshB I (20) (40) 20 40 40 100
Psp1406 I 20 60 <20 <20 100 100
Pst I (<20) (60) 100 80 (20) 80
Pvu I (<20) (20) (40) 80*2 (40) 100
Pvu II (80) 100 40 <20 (40) 100
RspRS II 80 100 100 100 100 100
Sac I 100 60 <20 <20 80 80
Sac II 40 20 <20 <20 100 40
Sal I <20 <20 100 <20 <20 200
Sau3A I (60) 80 100 <20 (80) 100
Sca I (<20) (<20) 100 (60) (<20) 100
Sfi I (40) 100 <20 <20 100 100
Sma I <20 <20 <20 <20 100 100
Smi I <10 <20 100 40 <10 100
SnaB I (20) (40) <20 <20 (40) 100
Spe I (80) 100 80 100 (80) 100
Sph I (20) (40) 100 120 (20) 100
Sse8387 I (120) 60*2 <20 <20 (60) 100
Ssp I (<20) (60) 40 (100) (80) 100
Stu I 60 100 60 80 140 100
Taq I 20 80 20 60 80 100
Tth111 I (20) 80 40 100 (80) 120
Van91 I <20 (20) 60 100 (60) 100
VpaK11B I <20 <20 60 (40) <20 100
Xba I <10 50*2 <10 <10 120 120
Xho I <20 40 100 100 30 100
Xsp I <20 60 <20 100 160 100

*1　Basal Buffer の組成は各々の制限酵素で異なる
*2　＋0.01％ BSA →100％
   Afl II、Aor13H I、EcoO65 I、Fok I、Hin1 I、Mun I、Nco I、Pvu I、Sse8387 I、Xba I
*3　H Bufferのみでも100％の相対活性が得られますが、0.01％ BSA、0.01％ Triton X-100の添加で反応液中の酵素の安定性がより向上します。

Universal Buffer別酵素

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L M H K T+BSA
Afa I
Alu I
Aor51H I
Apa I
ApaL I
BspT104 I
Bsp1286 I
BssH II
Dra I
Eae I
EcoO109 I
Hae II
Hae III
Hap II
Hha I
Hinf I
Kpn I
Mbo II
Mfl I
Mlu I
Msp I
Nae I
PmaC I
Sac I
Stu I
 Acc I
Acc II
Afa I
Afl II*1
Alu I
Aor51H I
Bsp T104 I
Bsp 1407 I
BssH II
Bst1107 I
Cla I
Dra I
Eae I
EcoO109 I
Eco81 I
Fok I*1
Hae II
Hae III
Hap II
Hha I
Hinc II
Hind III
Hinf I
Hin1 I*1
Kpn I
Mbo II
Mfl I
Mlu I
Msp I
Mun I*1
Nhe I
PmaC I
Psp 1406 I
Pvu II
Sac I
Sau3A I
Sfi I
Spe I
Sse8387 I*1
Stu I
Taq I
Tth111 I
Xba I*1
Xho I
Xsp I

 Ban II
Bgl II
BmgT120 I
BspT107 I
BssH II
BstP I
BstX I
Bst1107 I
Cla I
Cpo I
Dra I
EcoO65 I*1
EcoR I
EcoR V
EcoT14 I
EcoT22 I
Hae III
Hha I
Hinf I
Mbo I
Mlu I
Nde I
Not I*2
Pst I
Sal I
Sau3A I
Sca I
Smi I
Spe I
Sph I
Stu I
Taq I
Van91 I
VpaK11B I
Xho I
 Afa I
Aor13H I*1
BamH I
Ban II
Bci T130 I
Bcn I
Bln I
Bme T110 I
BspT107 I
Bst1107 I
Cla I
Cpo I
Dde I
Dra I
EcoT14 I
Fba I
Hae II
Hae III
Hha I
Hind III
Hinf I
Hpa I
Mbo I
Msp I
Nco I*1
Nde I
Nsb I
PshA I
Pst I
Pvu I*1
Spe I
Sph I
Stu I
Taq I
Tth111 I
Van91 I
Xho I
Xsp I
 Aat II
Acc I
Acc II
Afa I
Afl II
Alu I
Aor13H I
Aor51H I
ApaL I
Bcn I
Bpu 1102 I
Bsp T104 I
Bsp 1286 I
Bsp 1407
BssH II
Cla I
Dra I
Eae I
EcoO109 I
Eco81 I
Hae II
Hae III
Hap II
Hha I
Hinc II
Hinf I
Hin1 I
Mbo II
Mfl I
Mlu I
Msp I
Mun I
Nae I
Nde I
Nsb I
PmaC I
PshA I
Psp1406 I
RspRS II
Sac I
Sac II
Sfi I
Sma I
Stu I
Taq I
Xba I
Xho I
Xsp I
*1　＋0.01% BSA   *2　＋0.01% BSA＋0.01% Triton X-100

Universal Buffer Set

タカラバイオでは、各制限酵素に活性測定に用いた10×Buffer を添付しています。また、これらをセットにしたUniversal Buffer Set もご用意しております。各制限酵素をお買い上げいただく際、ご要望があれば1セットを無料で商品に同封いたしますので、ご用命ください。なお、当セットのみの発送はお受けできませんのでご了承ください。

Universal Buffer Set内容物組成
1. 10x L   1 ml 100 mM Tris-HCl (pH7.5)
100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol
2. 10x M   1 ml 100 mM Tris-HCl (pH7.5)
100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol
500 mM NaCl
3. 10x H   1 ml 500 mM Tris-HCl (pH7.5)
100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol
1,000 mM NaCl
4. 10x K   1 ml 200 mM Tris-HCl (pH8.5)
100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol
1,000 mM KCl
5. 10x T   1 ml
(BSA-free)		 330 mM Tris-acetate (pH7.9)
100 mM Mg-acetate
5 mM Dithiothreitol
660 mM K-acetate
6. 0.1% BSA   1 ml   滅菌水に溶解
7. 0.1% Triton X-100   1 ml

使用上の注意

反応液中に1/10量になるよう、バッファーを加える。
10×T溶液には、BSAは含まれていないので必ず最終濃度0.01％になるように、BSAを使用時に添加する。一部の制限酵素（*1と*2）では、反応系にBSAやTriton X-100を加えた場合に100％の活性を示すように設定されている。酵素に添付されているBSAやTriton X-100は10×濃度（0.1％）なので、バッファーと同様に反応液の1/10量を加えて反応を行うこと。

参考文献

1）Maniatis, T., et al.（1982）“Molecular Cloning”Cold Spring Harbor Laboratory, 98-106.
2）O'Farrell, P. H., et al.（1980） Mol. Gen. Genet. 179, 421-435.

10×Loading Buffer

タカラバイオでは全制限酵素およびPremix制限酵素に10×Loading Buffer（1 ml）を添付しています。

■組成

0.9％
 SDS
50％
 Glycerol
0.05％
 Bromophenol Blue

■使用上の注意

反応液量の1/10量以上の10×Loading Bufferを添加し、酵素反応を止め、アガロースゲルにアプライすること。また、室温での保存中にSDSが析出することがあるが、温浴で溶解して使用すること。

■保存

開封後は室温

Basal Buffer組成
Basal Bufferの塩濃度が酵素活性に及ぼす影響

制限酵素の使用に際して

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