本製品は、ミトコンドリアDNA上にあるcytochrome c oxidase subunit I (cox I)遺伝子領域の動物種間の多型をもとにして、原料肉のウシ、ブタ、ニワトリ、ウマ、ヒツジ、ウサギの6種の種判別を行うためのキットで、増幅・検出のためにThermal Cycler Dice Real Time SystemなどのリアルタイムPCR専用の増幅装置を用いて判定を行う。
本キットの増幅にはホットスタートPCR用酵素、TaKaRa Ex Taq HSを使用しているので、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。
本キットでは、cox I領域においてそれぞれの動物種を特異的に増幅するように設計したプライマーを使用し、さらに、それぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズするFAM標識プローブを用いて検出を行う。この検出にはサイクリングプローブ法を採用している。
サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、増幅中や増幅後の遺伝子断片の特定配列を効率良く検出することができる。プローブは、RNA部をはさんで一方が蛍光物質で、もう一方がその蛍光物質の発する蛍光を消光する物質（クエンチャー）で標識されている。このプローブは、インタクトな状態ではクエンチングにより強い蛍光を発することはないが、増幅産物中の相補的な配列とハイブリッドを形成した後にRNase HによりRNA部分で切断されることにより、強い蛍光を発するようになる。この蛍光強度を測定することで、増幅産物をモニターすることができる。
リアルタイムPCR装置を用いたリアルタイム検出であるため、電気泳動が不要となり迅速に判定結果が得られる（約80分）。また、本キットの反応液には、PCRによる増幅反応が問題なく行われていることを確認するための反応コントロール用の鋳型、プライマーおよび検出用のROX標識プローブが含まれており、阻害物質の混入によるPCR反応の阻害の有無を確認することができる。

（25 μl反応×120回、各20回×6種） 　

●	1. 2× CycleavePCR Reaction Mix*1	2×	750 μl×2 (120回分)
○	2. Primer・Probe Mix-1 (for beef) *2	5×	100 μl (20回分)
○	3. Primer・Probe Mix-2 (for pork) *2	5×	100 μl (20回分)
○	4. Primer・Probe Mix-3 (for chicken) *2	5×	100 μl (20回分)
○	5. Primer・Probe Mix-4 (for rabbit) *2	5×	100 μl (20回分)
○	6. Primer・Probe Mix-5 (for horse meat) *2	5×	100 μl (20回分)
○	7. Primer・Probe Mix-6 (for mutton) *2	5×	100 μl (20回分)
○	8. dH2O		1 ml
○	9. Control DNA for beef*3		50 μl (10回分)
○	10. Control DNA for pork*3		50 μl (10回分)
○	11. Control DNA for chicken*3		50 μl (10回分)
○	12. Control DNA for rabbit*3		50 μl (10回分)
○	13. Control DNA for horse meat*3		50 μl (10回分)
○	14. Control DNA for mutton*3		50 μl (10回分)

*1 酵素、Buffer、dNTP mixtureを含む。
*2 プライマー、プローブ、インターナルコントロールを含む。蛍光標識プローブにつき、遮光に留意すること。
*3 各Control DNAは、反応性確認用の陽性コントロールである（濃度；約2 ng/μl）。

－20℃

【試薬】 DNA抽出試薬

• NucleoSpin Tissue（製品コード 740952.10）
• NucleoSpin Tissue XS（製品コード 740901.10）など

【機器】 リアルタイムPCR装置^＊1および専用チューブ^＊2

• Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960）
• Thermal Cycler Dice Real TIme System Lite（製品コード TP700/TP760）
食品環境検査用ソフト（日本語表示）
またはThermal Cycler Dice Real Time System Software
• Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）など

*1	本製品はSmart Cycler II Systemではご使用できません。
*2	チューブ1本ごとにフラットキャップが付いているキャップ付き8連0.2 mlチューブをThermal Cycler Dice Real Time System専用として販売しています。チューブ間のコンタミの危険性が軽減できるので特にお勧めします。 0.2 ml 8-strip tube、individual Flat Caps（製品コード NJ600）

Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意している。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。
CycleavePCRキットによる定性解析（PDF、989 K）

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