QuickPrimer (Real Time)シリーズ

本製品は、岐阜大学大学院 医学系研究科病原体制御学分野 教授 江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました。

• 本プライマーシリーズは、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR420S/A/B）と組み合わせて使用するように 判定基準を設定しています。他の試薬を用いた場合、正確な判定ができませんので、必ずTB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)と 組み合わせてご使用ください。
• PCR反応は、QuickPrimerの取扱説明書に記載の条件で実施してください。
• 各Primerでの標準的な増幅曲線および融解曲線のパターンは、それぞれのデータシートをご確認ください。

【試薬】

TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR420S/A/B）^*
滅菌精製水（RNase-free Water（製品コード 9012）など）

＊ 本プライマーシリーズは、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR420S/A/B） と組み合わせて使用するように判定基準を設定しています。他の試薬を用いた場合、正確な判定ができませんので、 必ずTB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)と組み合わせてご使用ください。

【陽性コントロールDNA】

QuickPrimer (Real Time) シリーズ用Positive Control DNA 全9種類^*（製品コード MR401/MR403～MR406/MR408～MR410/MR415）

* 各陽性コントロールDNAは、滅菌精製水を用いて10倍希釈し、陽性コントロール反応に使用してください。
希釈用滅菌水には、RNase-free Water（製品コード 9012）をご利用いただくと便利です。

【機器】

リアルタイム PCR装置
Thermal Cycler Dice Real Time System III（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990）
Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700/TP760：終売）
Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）など

【機器専用反応チューブ】

Thermal Cycler Dice Real Time System III を使用する場合
　0.1 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ902）
Thermal Cycler Dice Real Time System IIおよびLite（終売） を使用する場合
　0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ600）など

【その他】

200 μl、20 μl、10 μl　各マイクロピペット
マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付）
卓上遠心機

• 反応液の調製から検体サンプルの添加まで、次の3つのエリアを設定し、物理的に隔離することを推奨する。各エリアにおいては、増幅産物の入ったチューブの開閉は避ける。
  
  　　○エリア1：反応液の調製、分注を行う。
  　　○エリア2：検体の調製を行う。
  　　○エリア3：反応液へ検体の添加を行う。
  
  本製品では増幅反応と検出をリアルタイムで行うため、反応終了後の増幅産物を電気泳動などで解析する必要はない。実験室内の核酸のコンタミネーション発生の原因となるので、増幅産物をチューブから取り出さないこと。
• リアルタイムPCR装置の各種Auto機能が適正に働かなかった場合は、誤判定の原因になる。必要に応じてリアルタイムPCR装置の取扱説明書に従い、Manual設定を行う。

1. サンプルの調製
2. リアルタイムPCR装置のセッティング
3. 反応液の調製と反応開始
   　反応液を調製
   　　　↓
   　反応液を反応チューブに分注
   　　　↓
   　陰性コントロール（滅菌精製水）、またはサンプル、または陽性コントロールDNA（10倍希釈液：用時調製）を添加
   　　　↓
   　反応チューブをリアルタイムPCR装置にセットし反応を開始
   　　　↓　画面上にリアルタイムに増幅曲線を表示
4. 反応終了
   　融解曲線分析によりTm値を求める
5. 得られたCt値、Tm値およびピークの波形をもとに結果を判定

• 本製品は遺伝子検出であるため、不活化された細菌も検出し、生菌のみを検出対象とするものではありません。また、設計したPrimerの配列内に遺伝子の変異や欠損／挿入が生じた際には、検出できない場合があります。（検査結果判定により発生する問題に関して、タカラバイオ株式会社は一切の責任を負いません。）
• 判定の確定には遺伝子検査だけではなく、培養検査などの結果も併用の上、ご判断ください。

遺伝子検出・検査　関連試薬の選択フローをご利用ください