GST-envZB融合タンパク質(約46.3 kDa)の発現と精製
pCold™ GST DNA（製品コード 3372）
方法:
pCold GST DNAに大腸菌由来envZB遺伝子(162 aa)を挿入し、TaKaRa Competent Cell BL21（製品コード 9126）に導入後、使用方法に従って発現誘導を行った。菌体破砕液を可溶性画分と不溶性画分に分けた。各画分について、12％ポリアクリルアミドゲルを用いたSDS-PAGE/CBB染色により分析した。
GST-envZB融合タンパク質を発現させた菌体破砕液の可溶性画分よりGlutathione-Superflow Resin 5.5 ml（製品コード 635607/635608）を用いて精製した。溶出は、33 mM還元型グルタチオンを含む50 mM Tris-HCl, pH 8.0を用いて行った（2 ml/画分）。得られた精製画分について、12％ポリアクリルアミドゲルを用いたSDS-PAGE/CBB染色により分析した。
pCold GST DNAに大腸菌由来envZB遺伝子(162 aa)を挿入し、TaKaRa Competent Cell BL21（製品コード 9126）に導入後、使用方法に従って発現誘導を行った。菌体破砕液を可溶性画分と不溶性画分に分けた。各画分について、12％ポリアクリルアミドゲルを用いたSDS-PAGE/CBB染色により分析した。
GST-envZB融合タンパク質を発現させた菌体破砕液の可溶性画分よりGlutathione-Superflow Resin 5.5 ml（製品コード 635607/635608）を用いて精製した。溶出は、33 mM還元型グルタチオンを含む50 mM Tris-HCl, pH 8.0を用いて行った（2 ml/画分）。得られた精製画分について、12％ポリアクリルアミドゲルを用いたSDS-PAGE/CBB染色により分析した。
結果:
GST融合タンパク質が高発現し、大部分が可溶性画分に得られた（図1）。
Glutathione-Superflow Resin精製により、目的のGST融合タンパク質が高純度に得られた（図2）
GST融合タンパク質が高発現し、大部分が可溶性画分に得られた（図1）。
Glutathione-Superflow Resin精製により、目的のGST融合タンパク質が高純度に得られた（図2）
【図1】
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【図2】
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M：Protein Molecular Weight Marker（Broad） T：菌体破砕液 S：菌体破砕液可溶性画分 P：菌体破砕液不溶性画分 |
Th: Glutathione-Superflow 非吸着画分 1: Glutathione-Superflow 溶出画分1 2: Glutathione-Superflow 溶出画分2 3: Glutathione-Superflow 溶出画分3 4: Glutathione-Superflow 溶出画分4 5: Glutathione Superflow 溶出画分5 |
