K562細胞を用いたRNPでのゲノム編集
【実験の流れ】
・K562細胞（ターゲットはCD81遺伝子）
【方法】
試薬の準備
Cas9タンパク質：Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)（製品コード 632641）
sgRNA：Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（製品コード 632635）によりCD81遺伝子に対するsgRNAを調製
遺伝子導入試薬：TransIT-X2（製品コード MIR6003）またはA社遺伝子導入製品。
1日目：細胞の準備
K562細胞を3.5×105 cells/mlに調製し、0.5 mlずつ24 well plateへ播種した。
2日目：ゲノム編集
- ＜TransIT-X2によるRNPでのゲノム編集 (24 well plate)＞
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- Opti-MEM I Reduced Serum Media 50 μlにCas9タンパク質とsgRNAを加えてピペッティングした後、37℃で5分間インキュベート
- TransIT-X2を1 μl添加してピペッティング
- 室温で15～30分間インキュベート
- 細胞へ添加
- ＜A社製品によるRNPでのゲノム編集＞
- 製品protocolに準じて実施
4日目：細胞の継代
9日目：Flow cytometryによるノックアウト効率（ゲノム編集効率）の解析
9日目：Flow cytometryによるノックアウト効率（ゲノム編集効率）の解析
K562細胞のCD81陰性細胞率の割合をノックアウト効率としてFlow cytometryを用いて解析した。
【結果】
K562細胞のCD81陰性細胞の割合を評価した。TransIT-X2はCの条件で10%を超え、A社試薬を用いたものと比較して高いノックアウト効率を示した。NTは処理の細胞を示す（図1）。
