TransIT-X2^® Reagent

Cas9タンパク質：Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)（製品コード 632641）を使用
sgRNA：Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（製品コード 632635）によりCD81遺伝子に対するsgRNAを調製
遺伝子導入試薬：TransIT-X2（製品コード MIR6003）を使用

ChiPSC12細胞を3.5×10⁵ cells/mlに調製し、0.5 mlずつ24 well plateへ播種した。

＜TransIT-X2によるRNPでのゲノム編集 (24 well plate)＞

1. Opti-MEM I Reduced Serum Media 50 μlにCas9タンパク質とsgRNAを加えピペッティングした後、37℃で5分間インキュベート
2. TransIT-X2を1 μl添加してピペッティング
3. 室温で15～30分間インキュベート
4. 細胞へ添加

細胞を剥離し継代

iPS細胞のCD81陰性細胞率の割合をノックアウト効率としてFlow cytometryを用いて解析した。