TaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A/B）を使用する場合
- 下記に示す反応液を氷上で調製する。
鋳型（検体サンプル等）以外のコンポーネントを必要本数＋α分調製し、反応チューブに分注後、軽くふたをする。
TaKaRa Taq HS (5 U/μl) 0.25 μl 10×PCR Buffer（Mg2+ plus）＊1 5 μl dU plus dNTP Mixture＊2 4 μl MgCl2＊2、3 1.5 μl UNG＊2、4 0.5 μl （Template ＜500 ng） Primer 1 10～50 pmol （最終濃度0.2～1.0 μM） Primer 2 10～50 pmol （最終濃度0.2～1.0 μM） 滅菌精製水 Up to 50 μl ＊1 TaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A/B）に添付。
＊2 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kitに添付。
＊3 dUTPはdTTPの3倍濃度に設定されているため、全体的にdNTP濃度が高くなる。PCR BufferにはMgCl2が含まれているが、MgCl2とdNTPの量のバランスを保つためMgCl2を追加する必要がある。10×PCR Buffer（Mg2+ free）を使用する場合には、4.5 μl添加する。
＊4 標準的な使用量は、50 μlの反応液量の場合、1反応あたり1 Uである。
- サンプル（鋳型）の添加
1．で分注した反応液にサンプル（鋳型）を添加し、しっかりふたをする。 - 0.2 mlチューブ用の卓上遠心機で軽く遠心を行い、サーマルサイクラーにセットする。
- UNG処理とPCR増幅を行う。
初めにUNG処理を行い、次にUNGの熱失活を行う。続いて、通常のPCR条件による増幅を行う。PCR条件は増幅サイズ等に応じて設定する。
（例）1 kb DNAを増幅する場合 25℃ 10分（UNG処理）＊1 95℃ 2分（UNGの熱失活）＊1 98℃ 10秒＊2 30サイクル55℃ 30秒 72℃ 1分＊3 ＊1 UNG処理の条件は、増幅鎖長に関係なく一定である。
＊2 PCRの変性の条件は、サーマルサイクラーの使用機種と反応チューブの種類に合わせて設定する。設定の目安としては、98℃の場合は5～10秒、94℃の場合は20～30秒である。
＊3 本製品では、dTTPの代わりにdUTPを使用するため、やや増幅効率が低下する場合がある。増幅効率が悪い場合は、伸長反応時間を延長する。
- PCR 反応液を電気泳動等で分析する。
