T4 DNA Ligase

Cloned
反応用バッファー添付
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
2011A

TKR

タカラバイオ(株)
T4 DNA Ligase
修飾酵素
25,000 U ¥15,000
¥12,000
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
2011A
2011B(A×5)

TKR

タカラバイオ(株)
T4 DNA Ligase
修飾酵素
125,000 U ¥54,000
¥43,200
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
2011B(A×5)
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製品説明

本酵素は、隣接したDNA鎖の5’-P末端と3’-OH末端をホスホジエステル結合で連結する酵素である。補酵素としてATPを要求し、反応の中間体としてEnzyme-ATP complexが作られ、これがDNAに作用する。本酵素は突出末端どうしでも、平滑末端どうしでも連結できる。また、DNAとRNA、RNAどうしもわずかに連結できる。

保存

-20℃

濃度

350 U/μl

形状

10 mMTris-HCl(pH7.5)
50 mMKCl
1 mMDTT
0.1 mMEDTA
50%グリセロール

添付Buffer組成(10×)

660 mMTris-HCl(pH7.6)
66 mMMgCl2
100 mMDTT
1 mMATP

活性の定義

6 μg/20 μlのλDNA-Hind III分解物を、16℃で約30分間に90%以上ライゲーションさせる酵素活性を1 Uとする。
本酵素の1 Uは、ATP-PPi交換反応における0.008 Weiss Unitに相当する。

Weiss Unit反応液組成:
66 mM Tris-HCl(pH7.6)
6.6 mM MgCl2
10 mM DTT
66 μM ATP
3.3 μM [32P] Na4P2O7

活性測定用反応液組成

66 mM Tris-HCl緩衝液(pH7.6)
6.6 mM MgCl2
10 mM DTT
0.1 mM ATP
6 μg/20 μlλDNA-Hind III分解物

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis(CoA)をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

使用上の注意

ライゲーション反応は、末端塩基配列の違いにより、反応速度が異なる。一般に次のような傾向がある。
突出末端 Hind III>Pst I>EcoR I>BamH I>Sal I
Hind III siteはSal I siteより10~40倍速くライゲーションされる)
平滑末端 Hae III>Alu I>Hinc II>Sma I
Hae III siteはSma I siteより5~10倍速くライゲーションされる)
  EcoR V>Sca I>Pvu II>Nru I

用途

  • インサートDNAとベクターDNAとの連結
  • DNA断片とリンカーあるいはアダプターDNAとの連結

起源

Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase

一般的性質

  • 分子量
    約62,000
  • サブユニット
    シングルポリペプチド
  • 至適pH
    pH7.6(pH7.2~7.8、Tris-HCl)
    (pH6.9で46%、pH8.0で65%に活性低下)
  • 補因子
    ATP
  • 活性化剤
    二価カチオン Mg2+(至適濃度:10 mM)
    還 元 剤 DTT、2-メルカプトエタノール
    (2-メルカプトエタノールの方が効果大)
  • 阻害剤
    dATP(拮抗阻害剤)
    高濃度一価カチオン 200 mM Na+、200 mM K+
    (ただし、この濃度において10%ポリエチレングリコール(PEG)#6000存在下では逆に活性化作用を示す)
    多 糖 類 ヘパリン、カラギナン
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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