Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)

Cloned
反応用バッファー添付
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
2140A

TKR

タカラバイオ(株)
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
カスタム製造について
200 U ¥14,000
説明書・データシート・ベクター情報
2140A
2140B(A×5)

TKR

タカラバイオ(株)
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
カスタム製造について
1,000 U ¥54,000
説明書・データシート・ベクター情報
2140B(A×5)
2140AK

TKR

タカラバイオ(株)
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
労働安全衛生法 安全データシート(SDS)添付
200 U ¥14,000
説明書・データシート・ベクター情報
2140AK
2140BK(AK×5)

TKR

タカラバイオ(株)
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
労働安全衛生法 安全データシート(SDS)添付
1,000 U ¥54,000
説明書・データシート・ベクター情報
2140BK(AK×5)
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製品説明

本酵素は、鋳型、プライマー(DNAおよびRNAともに可)存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する。本酵素は、E. coli DNA polymeraseIの構造遺伝子pol Aの開始コドンから下流約1,000 bpまでを欠失させたものをクローニングした大腸菌より精製している。そのため、3’→5’ exonuclease活性は含まれるが、5’→3’ exonuclease活性は全く含まれない。
また製品コード 2140AK/BKの製品は、Kilo-Sequencing用Deletion Kit (製品コード 6030)用に濃度調製したもので、形状組成の一部をグリセロールからエチレングリコールに変えています。

保存

-20℃

濃度

5 U/μl(製品コード 2140A、2140B)
2 U/μl(製品コード 2140AK、2140BK)

形状

(製品コード 2140A、2140B)
リン酸カリウム緩衝液(pH6.5)50 mM
DTT1 mM
グリセロール50%

(製品コード 2140AK、2140BK)
リン酸カリウム緩衝液(pH6.5)50 mM
DTT1 mM
エチレングリコール50%

添付Buffer組成(10×)

(製品コード 2140A、2140B)
100 mMTris-HCl(pH 7.5)
70 mM MgCl2
1 mMDTT

注意

製品コード 2140AK、2140BKには反応用バッファーは添付されていない。

活性の定義

Poly d(A-T)合成DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH7.4において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

67 mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.4)
6.7 mMMgCl2
0.1 mMDTT
20 μM鋳型DNA
33 μMdATP
33 μM[3H]dTTP

純度

SDS電気泳動で95%以上の純度を示す。
10 Uの本酵素と、1 μgのclosed circular(RF I)pBR322 DNAとを37℃、1時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

使用上の注意

  • 希釈による失活はないが、強く撹拌すると失活することがある。
  • 5’→3’exonuclease活性が含まれないため、ニックトランスレーション活性を示さない。
  • DNA Polymerase I と同じく、ddNTPを阻害されることなく取り込む。
  • T4 DNA Polymeraseに比べて、鋳型DNAの高次構造に対しても抵抗性が高い。
  • DNAに対する親和性が強く、過剰に用いるとaggregationが起こり、反応が阻害されることがある。
  • 5’-突出末端の修飾に用いると、filling後に1塩基余分に付加する場合がある。6)

用途

  • dideoxy法によるシーケンシング(Sanger法)3)
  • この用途には特に製品コード 2140AK, 2140BKが適している。
  • 二本鎖DNA末端の平滑化4)
  • Oligonucleotide directed mutagenesisにおける二本鎖DNA合成5)
  • random primerを用いたDNA標識

起源

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow fragment

触媒する反応

1.5'→3'DNA polymerase活性
鋳型、プライマー(DNA、RNA共に可)存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。

ddNTPによる拮抗阻害がかかりにくいのでM13 dideoxy法によるシーケンシングに用いられる。

2.一本鎖特異的3'→5' exonuclease活性

Klenowの3'→5'exonuclease活性は比較的弱い(T4 polの100~1000分の1)ので3'突出末端の平滑化には適さない。

一般的性質

  • 分子量
    68,000
  • サブユニット
    1分子中にZn2+を1分子含む一本鎖単純ポリペプチド
  • 至適pH
    pH7.4
  • 補因子
    Mg 2+
  • 安定性
    vortex等の撹拌により失活する(ピペッティングにより混合すること)
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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