Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は、T7プロモーター配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の鋳型DNAに相補的な一本鎖RNAを合成する酵素である。 T7プロモーター配列に高い特異性を示し、他の生物由来のプロモーターを認識しない。
保存
－20℃
濃度
10～50 U/μl
形状
| 20 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.9） |
| 1 mM | DTT |
| 0.1 mM | EDTA |
| 100 mM | NaCl |
| 50 % | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 400 mM | Tris-HCl（pH8.0） |
| 80 mM | MgCl2 |
| 20 mM | スペルミジン |
| 50 mM | DTT［別添付］ |
活性の定義
37℃、pH8.0において、1時間に1 nmolの[3H]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 40 mM | Tris-HCl（pH8.0） |
| 8 mM | MgCl2 |
| 5 mM | DTT |
| 2 mM | スペルミジン |
| 各0.4 mM | ATP、UTP、CTP |
| 0.4 mM | [3H]GTP |
| 1 μg/50 μl | pT7-2 DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
用途
- 一本鎖RNAの合成
- 高標識RNAプローブの作製
- siRNA前駆体の作製
- RNA splicing反応の前駆体の作製
- Cap analogをprimerとしたcapped mRNAの作製
起源
Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T7 RNA polymerase gene
一般的性質
- 分子量
約98,000 - サブユニット
一本鎖単純ポリペプチド - 至適pH
pH8.0 - 補因子
Mg2＋（至適濃度：8 mM）
還元剤（5mM DTT） - 活性化剤
2 mMスペルミジン（4 mMではDNAと共沈） - 阻害剤
NEM（10－4M）、pCMB（5×10－8M）で失活
相対活性
反応温度と相対活性（37℃を100％としたとき）
pHと相対活性
| 反応温度（℃） | 20 | 25 | 37 |
| 相対活性（％） | 10 | 50 | 100 |
| pH | 7.5 | 7.7 | 7.8 | 8.0 |
| 相対活性（％） | 17 | 62 | 70 | 100 |
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