Kudoa septempunctata (18S rRNA)qPCR Detection Kit

Kudoa septempunctata（18S rRNA）qPCR Detection Kitは、厚生労働省 医薬・生活衛生局 生活衛生・食品安全部 監視安全課より通知された「Kudoa septempunctataの検査法について」（平成28年4月27日付け生食監発0427第3号）（以下「公定法」と記載する）と同じ塩基配列のプライマーならびにプローブを使用したリアルタイムPCR法によるクドア・セプテンプンクタータ検出キットである。Kudoa septempunctataは魚の筋肉へ寄生する粘液胞子虫であり、生食ヒラメによる食中毒の原因の一つと考えられている。
本キットで増幅反応に用いるPremix Ex Taqは、抗Taq抗体を利用したホットスタートPCR用酵素TaKaRa Ex Taq HSとリアルタイムPCR用に最適化されたバッファーの組み合わせにより、非特異的増幅を抑制し、高い増幅効率、高い検出感度でリアルタイムPCRを行うことができる。また、反応時間が極めて短い高速PCRに適している。 増幅産物の検出には、公定法と同じFAM（レポーター）／TAMRA（クエンチャ―）で標識されたプローブを採用している。プローブは、5’側を蛍光物質（FAMなど）で、3’側をクエンチャー物質（TAMRAなど）で修飾したオリゴヌクレオチドである。アニール条件下では、プローブは鋳型DNAに特異的にハイブリダイズするが、蛍光はクエンチャーによって抑制されている。伸長反応時、Taq DNAポリメラーゼの持つ 5’→3’exonuclease活性により、鋳型DNAにハイブリダイズしたプローブが分解され、クエンチャーによる抑制が解除されることで蛍光を発する。この蛍光強度を測定することで増幅産物をモニターすることができる。

（20 μl反応、50回分）

1.	Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（2×conc.）	500 μl
2.	Kudoa Primer/Probe Mix（10×conc.）＊1	100 μl
3.	dH2O	1 ml
4.	ROX Reference Dye (50×conc.)	20 μl
5.	ROX Reference Dye II (50×conc.)	20 μl
6.	Kudoa Positive Control (2.5×107 copies/μl)＊2	50 μl
7.	EASY Dilution (for Real Time PCR)	1 ml×2本

－20℃
Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）は、融解後は4℃で保存し、凍結融解を避けてください。
4℃で6ヵ月安定です。長期保存が必要な場合は、最初の融解時に小分け分注して－20℃保存してください。

本製品に含まれるKudoa Positive Controlは、タカラバイオで合成したKudoa septempunctataの配列をもつプラスミドDNAである。
EASY Dilution（for Real Time PCR）を用いて、Kudoa Positive Controlの段階希釈系列を作製し、検量線を作成することで定量解析を行うことができる。解析法については公定法をご参照下さい。

Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意している。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。

定量解析（絶対定量モード）用（PDF、993 K）

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