Cycleave RT-PCR Giardia (18S rRNA) Detection Kit

ジアルジア症はジアルジア（Giardia lamblia：異名G. intestinalisまたはG. duodenalis）の感染によって引き起こされる下痢症疾患である。ジアルジアは別名ランブル鞭毛虫とも呼ばれる鞭毛虫類に属する原虫で、ヒトや動物（ネコ、イヌ、ウシ、鹿など）の腸に寄生し、糞便中に感染性を持ったシストが大量に排出され、汚染された食品や飲料水を介してヒトに経口感染する。シストは感染力が強く、水中で数ヵ月程度は感染力が衰えないという報告もあり、小型であるため浄水処理により完全除去が難しく塩素消毒にも抵抗性を示す。「感染症新法」において、ジアルジア症は5類感染症（全数把握疾患）に指定されている。検出方法としては、蛍光抗体染色やヨード・ヨードカリ染色による検鏡法で原虫の確認が行われている。

本製品は、ジアルジア18S rRNA遺伝子をターゲットとしてゲノムDNA上の遺伝子に加え、ジアルジア由来RNAを逆転写したcDNAも検出するキットである。ゲノムDNAに対しRNAはコピー数が多いことが知られているため、RNAを対象としたリアルタイムPCR法（リアルタイムRT-PCR法）により微量のジアルジアを検出できる。リアルタイムPCR法は、簡便性、迅速性、反応特異性の高さから、近年、環境衛生管理の分野において急速に普及している。ジアルジアの検出においても、有効活用されることが期待されている。

本キットの増幅反応には、Hot Start PCR用酵素のTaKaRa Ex Taq Hot Start Versionを使用しており、反応液調製時などサイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を抑制しながら高感度の検出が可能である。増幅産物の検出にサイクリングプローブ法を採用している。この方法はRNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法で、非常に特異性の高い検出が可能である。
本キットには、ジアルジア18S rRNA遺伝子を検出するためのFAM標識プローブ、インターナルコントロールDNAとインターナルコントロール検出用のROX標識プローブが含まれており、2波長を同時にモニタリングすることで、1本のチューブでジアルジア遺伝子の検出とインターナルコントロールDNAの検出による偽陰性の確認試験が可能である。
Giardia Positive Controlを用いて検量線を作成することでサンプル中に含まれるジアルジアの定量も可能である。

詳しくはこちらをご覧ください。

（50回反応分、25 μl反応系）

●	1.	5×PrimeScript RT Master Mix	5×conc.	100 μl
●	2.	2×Cycleave Reaction Mixture (Giardia)	2×conc.	625 μl
●	3.	Giardia Primer/Probe Mix（FAM, ROX）*1	5×conc.	250 μl
○	4.	RNase Free dH2O		1 ml
●	5.	Lysis Buffer		625 μl×4
●	6.	Proteinase K		50 μl
○	7.	dH2O (for Dilution)		150 μl
●	8.	Giardia Positive Control *2	1×105 copies/μl	50 μl
●	9.	EASY Dilution (for Real Time PCR)		1 ml×2

*1	蛍光標識プローブを含んでいるので、遮光すること。
*2	リアルタイムPCR コンポーネント（1～4）に誤って混入すると、正しい検出反応を行うことができなくなる。開封後は、PCRコンポーネント（1～4）は付属のキットケースに移し、別個に保存する。

－20℃

検出が可能であった種：
　　Giardia lamblia（Assemblage A）

Giardia Primer/Probe Mix の配列情報から検出が可能と推測される種：
　　Giardia lamblia（Assemblage B、Assemblage C 、Assemblage D、Assemblage E）
　　Giardia psittaci
　　Giardia microti

以下の種について、クロス反応がないことを確認している。
　　Cryptosporidium parvum

Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意している。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。
定性解析（＋／－判定）用（PDF、946 K） 定量解析（絶対定量モード）用（PDF、993 K） リアルタイムPCRによるクリプトスポリジウム、ジアルジア検出（PDF、1.12 MB）

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