プラスミドミニプレップ：迅速精製ながら高収量
- pH指示試薬LyseControlにより、大腸菌のアルカリ溶解、中和反応を可視化
- ～30 μgのプラスミドDNA精製が可能
- わずか14分間でシーケンスグレードのプラスミドを精製
- RNase A溶液を添付、溶解なしですぐに抽出作業に使用可能
製品説明
NucleoSpin Plasmid EasyPureはシーケンスグレードのプラスミドDNAを迅速かつ高収量で精製するスピンカラムキットである。精製過程の洗浄と乾燥をシングルステップで行うため、わずか14分で大腸菌培養液からプラスミドDNAを精製でき、さらに、30 μgまでのプラスミドDNAを調製することができる。
Lysis Bufferには、青い色素を含んだpH指示試薬であるLyseControlが含まれており、大腸菌懸濁液にLysis Bufferを添加すると懸濁液は青色を示す。Neutralization Bufferを添加し混合することで、懸濁液は中和され無色に変化する。LyseControlによって完全なアルカリ溶解・中和を確認できるため、最適な結果を得ることができる。
Lysis Bufferには、青い色素を含んだpH指示試薬であるLyseControlが含まれており、大腸菌懸濁液にLysis Bufferを添加すると懸濁液は青色を示す。Neutralization Bufferを添加し混合することで、懸濁液は中和され無色に変化する。LyseControlによって完全なアルカリ溶解・中和を確認できるため、最適な結果を得ることができる。
| 原理 | シリカメンブレン法 |
| 形状 | ミニスピンカラム |
| サンプル量 | 大腸菌培養液2～10 ml |
| プラスミドDNAサイズ | ＜15 kb |
| 回収量 | 15～30 μg |
| A260/280 | 1.80～1.85 |
| 溶出液量 | 50 μl |
| 精製時間 | 14分 |
| 結合容量 | 35 μg |
図A．培養液量ごとのプラスミドDNA収量比較
NucleoSpin Plasmid EasyPure（MN）および他社プラスミドDNA精製キット（Q、S、I、F、P）を用いて、大腸菌DH5α培養液 1 ml、 2 ml、3 mlおよび4 mlからプラスミドDNA（pcDNA3.1）の精製および収量の確認を行った。各3連の精製実験を行い、中央値をプロットした。
NucleoSpin Plasmid EasyPure（MN）および他社プラスミドDNA精製キット（Q、S、I、F、P）を用いて、大腸菌DH5α培養液 1 ml、 2 ml、3 mlおよび4 mlからプラスミドDNA（pcDNA3.1）の精製および収量の確認を行った。各3連の精製実験を行い、中央値をプロットした。
図B．溶出プラスミドDNAのアガロースゲル電気泳動
溶出プラスミドDNA 50 μlのうち、2.5 μlを1％ TAEアガロースゲル電気泳動を行った。
MN：NucleoSpin Plasmid EasyPure
溶出プラスミドDNA 50 μlのうち、2.5 μlを1％ TAEアガロースゲル電気泳動を行った。
MN：NucleoSpin Plasmid EasyPure
図C．6サンプルの精製に要する実験時間比較
MN：NucleoSpin Plasmid EasyPure
MN：NucleoSpin Plasmid EasyPure
内容
・Resuspension Buffer A1
・Lysis Buffer A2
・Neutralization Buffer A3
・Wash Buffer AQ（Concentrate）＊
・Elution Buffer AE
・Liquid RNase A
・NucleoSpin Plasmid EasyPure Columns（dark blue rings）
・Collection Tubes（2 ml）
* 説明書に従って使用前にエタノールを添加すること
・Lysis Buffer A2
・Neutralization Buffer A3
・Wash Buffer AQ（Concentrate）＊
・Elution Buffer AE
・Liquid RNase A
・NucleoSpin Plasmid EasyPure Columns（dark blue rings）
・Collection Tubes（2 ml）
* 説明書に従って使用前にエタノールを添加すること
キット以外に必要な試薬、器具（主なもの）
試薬
・96～100％エタノール
器具
・1.5 mlマイクロチューブ
・ピペットチップ（滅菌済）
・ピペット
・微量高速遠心機
・96～100％エタノール
器具
・1.5 mlマイクロチューブ
・ピペットチップ（滅菌済）
・ピペット
・微量高速遠心機
保存
室温
（Liquid RNase Aを添加したBuffer A1は4℃で保存する。6ヵ月間安定）
※Buffer A2にはSDSが含まれているため、20℃以下で保存すると、沈殿が生じることがある。
沈殿が生じた場合は、30～40℃で数分間、ボトルを保温し、混合して溶解した後に使用する。
（Liquid RNase Aを添加したBuffer A1は4℃で保存する。6ヵ月間安定）
※Buffer A2にはSDSが含まれているため、20℃以下で保存すると、沈殿が生じることがある。
沈殿が生じた場合は、30～40℃で数分間、ボトルを保温し、混合して溶解した後に使用する。
操作手順
用途
- 高コピープラスミドの小スケール迅速ミニプレップ
- シーケンス、クローニング、形質転換、制限酵素解析など
NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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