Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は、隣接したDNA鎖の5’-P末端と3’-OH末端をホスホジエステル結合で連結する酵素である。補酵素としてATPを要求し、反応の中間体としてEnzyme-ATP complexが作られ、これがDNAに作用する。本酵素は突出末端どうしでも、平滑末端どうしでも連結できる。また、DNAとRNA、RNAどうしもわずかに連結できる。
保存
－20℃
濃度
350 U/μl
形状
| 10 mM | Tris-HCl（pH7.5） |
| 50 mM | KCl |
| 1 mM | DTT |
| 0.1 mM | EDTA |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 660 mM | Tris-HCl（pH7.6） |
| 66 mM | MgCl2 |
| 100 mM | DTT |
| 1 mM | ATP |
活性の定義
6 μg/20 μlのλDNA-Hind III分解物を、16℃で約30分間に90％以上ライゲーションさせる酵素活性を1 Uとする。
本酵素の1 Uは、ATP-PPi交換反応における0.008 Weiss Unitに相当する。
Weiss Unit反応液組成：
本酵素の1 Uは、ATP-PPi交換反応における0.008 Weiss Unitに相当する。
Weiss Unit反応液組成：
| 66 mM | Tris-HCl（pH7.6） |
| 6.6 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 66 μM | ATP |
| 3.3 μM | [32P] Na4P2O7 |
活性測定用反応液組成
| 66 mM | Tris-HCl緩衝液（pH7.6） |
| 6.6 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 0.1 mM | ATP |
| 6 μg/20 μl | λDNA-Hind III分解物 |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
ライゲーション反応は、末端塩基配列の違いにより、反応速度が異なる。一般に次のような傾向がある。
| 突出末端 | ： | Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I |
| （Hind III siteはSal I siteより10～40倍速くライゲーションされる） | ||
| 平滑末端 | ： | Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I |
| （Hae III siteはSma I siteより5～10倍速くライゲーションされる） | ||
| EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I |
用途
- インサートDNAとベクターDNAとの連結
- DNA断片とリンカーあるいはアダプターDNAとの連結
起源
Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase
一般的性質
- 分子量
約62,000 - サブユニット
シングルポリペプチド - 至適pH
pH7.6（pH7.2～7.8、Tris-HCl）
（pH6.9で46％、pH8.0で65％に活性低下） - 補因子
ATP - 活性化剤
二価カチオン ： Mg2+（至適濃度：10 mM） 還 元 剤 ： DTT、2-メルカプトエタノール
(2-メルカプトエタノールの方が効果大） - 阻害剤
dATP（拮抗阻害剤）高濃度一価カチオン ： 200 mM Na+、200 mM K+
(ただし、この濃度において10％ポリエチレングリコール（PEG）#6000存在下では逆に活性化作用を示す）多 糖 類 ： ヘパリン、カラギナン
- 注意事項
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