TaKaRa LA Taq^®

TaKaRa LA Taqは、LA PCRの原理を応用した3’→5’exonuclease活性（proof reading活性）を持つ耐熱性DNA Polymeraseである。通常のPCR条件下において、従来のTaq DNA Polymeraseと比べて高い増幅効率が期待でき、基本的にはどのような鋳型DNAにも適用できるが、特に15 kb以上の増幅には効果的である。また、複雑な二次構造（GC rich等）をもつDNAを鋳型とする場合には、GC richなDNAやリピート配列をもつDNAの増幅用に最適化したバッファーを添付しているTaKaRa LA Taq with GC Buffer (製品コード RR02AG/BG)の使用が有効である。

（125 U）
TaKaRa LA Taq （製品コード RR002A）

TaKaRa LA Taq （5 U/μl）	25 μl
10×LA PCR Buffer II （Mg2＋ free）	1 ml
MgCl2 （25 mM）	1 ml
dNTP Mixture （各 2.5 mM）	400 μl

TaKaRa LA Taq with GC Buffer （製品コード RR02AG）

TaKaRa LA Taq （5 U/μl）	25 μl
2×GC Buffer I* （5 mM Mg2＋ plus）	1.25 ml
2×GC Buffer II* （5 mM Mg2＋ plus）	1.25 ml
dNTP Mixture （各 2.5 mM）	400 μl

* 製品コード RR02AG/BGには2種類の反応バッファーを添付しています。まず、2×GC Buffer Iをお試しください。Buffer Iで増幅できないテンプレートの場合にはBuffer IIをお試しください。改善される場合があります。

【注意】GC Buffer IおよびGC Buffer IIを用いた場合、LA PCR Buffer IIを用いた場合に比べて、PCR産物のエラー率が高くなりますので、ご注意ください。

－20℃

濃度	各2.5 mM
形状	水溶液（ナトリウム塩）pH7～9
純度	各98％以上

* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。

活性化サケ精子DNAを鋳型/プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。

●25 Uの本酵素と1 μgのλ-Hind III分解物とを74℃、16時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●25 Uの本酵素と1 μgのsupercoiled pBR322 DNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●25 Uの本酵素と1 μgのλDNAとを74℃、16時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

TaKaRa LA Taq を用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にA が1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19 (Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。ただし、長鎖のPCR産物（5 kb以上）のT-Vectorへのクローニングは効率がかなり悪くなる。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

（10×LA PCR Buffer IIを用いる場合）

TaKaRa LA Taq（5 U/μl）	0.5 μl
10×LA PCR Buffer II（Mg2+ free）	5 μl
25 mM MgCl2（終濃度 2.5mM）	5 μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	8 μl
Template	＜1 μg
Primer 1	0.2～1.0 μM （final conc.）
Primer 2	0.2～1.0 μM （final conc.）
滅菌精製水	up to 50 μl

（2×GC Bufferを用いる場合）

TaKaRa LA Taq（5 U/μl）	0.5 μl
2×GC Buffer I or II	25 μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	8 μl
Template	＜1 μg
Primer 1	0.2～1.0 μM （final conc.）
Primer 2	0.2～1.0 μM （final conc.）
滅菌精製水	up to 50 μl

●ヒトゲノム DNAを鋳型として、10×LA PCR Buffer IIを用いて、 17.5 kb DNAを増幅する場合

94℃、1 min
↓
98℃、10 sec 68℃、15 min		30 cycles
↓
72℃、10 min

注意） 変性の条件は、使用機種とチューブの種類にあわせて設定してください。
設定の目安は、98℃ 5～10 sec、または94℃ 20～ 30 secです。

●ヒトゲノム DNAを鋳型として、2×GC Bufferを用いて、1,255 bp （GC 含量65％）を増幅する場合

94℃、1 min
↓
94℃、30 sec 60℃、30 sec 72℃、2 min		30 cycles
↓
72℃、5 min

弊社では、さまざまな特長をもつPCR酵素を用意しています。
用途に応じて選択してください。

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