Pyrobest™ DNA Polymerase

正確さが要求される増幅に

反応用バッファー添付＋dNTP

製品コード	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
Takara Code	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
R005A	TKR タカラバイオ（株）	Pyrobest™ DNA Polymerase	125 U	￥32,000				個
R005A	TKR タカラバイオ（株）	Pyrobest™ DNA Polymerase	125 U	￥32,000				個
R005B(A×4)	TKR タカラバイオ（株）	Pyrobest™ DNA Polymerase	500 U	￥102,000				個
R005B(A×4)	TKR タカラバイオ（株）	Pyrobest™ DNA Polymerase	500 U	￥102,000				個

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製品説明

本製品は、Pyrococcus sp.由来の3'→5' exonuclease活性（proof reading 活性）を有する耐熱性α型DNAポリメラーゼである。Pyrococcus furiosus由来のPfu DNAポリメラーゼや、Vent DNAポリメラーゼと同等の正確性の高い増幅を行うことができ、しかもTaq DNAポリメラーゼと同程度の増幅効率がある。また、TaKaRa TaqなどのTaq DNAポリメラーゼとは異なり、hot start法を用いなくても非特異的増幅が抑えられるのも特長である。

内容

（125 U）

Pyrobest DNA Polymerase	125 U
10×Pyrobest Buffer II (10 mM Mg²⁺ plus）	500 μl
dNTP Mixture	400 μl

保存

－20℃

形状

50 mM	Tris-HCl （pH8.2）
0.1 mM	EDTA
1 mM	DTT
0.1％	Tween 20
0.1％	NP-40
50％	Glycerol

添付dNTP Mixture^*

濃度	各2.5 mM
形状	水溶液（ナトリウム塩）pH7～9
純度	各98％以上

* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。

活性の定義

活性化サケ精子DNAを鋳型／プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

20 mM	Tris-HCl 緩衝液（pH8.3, 37℃）
10 mM	KCl
6 mM	(NH₄)₂SO₄
2 mM	MgCl₂
0.1％	Triton X-100
0.001％	BSA
各 200 μM	dATP・dGTP・dCTP
100 μM	［³H］TTP
0.4 mg/ml	活性化サケ精子 DNA

純度

●10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物を74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

一般的なPCR反応液組成（Total 50 μl）

Pyrobest DNA Polymerase（5 U/μl）	0.25 μl
10×Pyrobest Buffer II	5 μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	4 μl
Template	＜500 ng
Primer 1	0.2～1.0 μM （final conc.）
Primer 2	0.2～1.0 μM （final conc.）
滅菌精製水	up to 50 μl

PCR条件（例）

1 kb DNA を増幅する場合

98℃、10 sec
68℃、1 min

30 cycles

または

98℃、10 sec
55℃、30 sec
72℃、1 min

30 cycles

（注意）
・基本的には2ステップPCRをお勧めします。プライマーのTm値が低く、2ステップPCRが難しい場合には、3ステップPCRをお試しください。
・変性の条件は、使用機種とチューブの種類にあわせて設定してください。変性時間の設定の目安は、94℃の場合は20 sec～30 sec、98℃の場合は1sec～10sec です。

PCR産物について

Pyrobest DNA polymeraseを用いて増幅したPCR産物の多くは平滑末端である。したがって、そのPCR産物をそのまま(必要に応じてリン酸化して)平滑末端のベクターにクローニングすることが可能である。

PCR 検定

●大腸菌ゲノムDNAを鋳型としたPCR反応（増幅産物8 kb）において良好な増幅が見られることを確認している。
●ヒトゲノムDNAを鋳型としたsingle copy gene（p53遺伝子）のPCR反応（増幅産物2.9 kb）において良好な増幅が見られることを確認している。

用途

Polymerase Chain Reaction（PCR）法によるDNA増幅、特に正確性が要求されるPCRに最適。

使用上の注意

イノシンを含むプライマーの使用は避けてください。

補足資料

弊社では、さまざまな特長をもつPCR酵素を用意しています。
用途に応じて選択してください。

PCR Enzyme選択フローチャート

技術情報

Application

Pyrobest™ DNA Polymerase、TaKaRa Taq™、C社Cloned PfuおよびC社改良Cloned Pfuの比較（λDNAの増幅）
Pyrobest™ DNA Polymerase、TaKaRa Taq™およびA社Hot start用Taqの比較
 Pyrobest™ DNA Polymeraseを用いた増幅例
 Human p53 region 2.9 kbの増幅反応
 大腸菌8 kbの増幅反応
 大腸菌2 kbの増幅反応での感度

使用文献・参考文献

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注意事項

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