Pyrobest™ DNA Polymerase

本製品は、Pyrococcus sp.由来の3'→5' exonuclease活性（proof reading 活性）を有する耐熱性α型DNAポリメラーゼである。Pyrococcus furiosus由来のPfu DNAポリメラーゼや、Vent DNAポリメラーゼと同等の正確性の高い増幅を行うことができ、しかもTaq DNAポリメラーゼと同程度の増幅効率がある。また、TaKaRa TaqなどのTaq DNAポリメラーゼとは異なり、hot start法を用いなくても非特異的増幅が抑えられるのも特長である。

（125 U）

Pyrobest DNA Polymerase	125 U
10×Pyrobest Buffer II (10 mM Mg2+ plus）	500 μl
dNTP Mixture	400 μl

－20℃

濃度	各2.5 mM
形状	水溶液（ナトリウム塩）pH7～9
純度	各98％以上

* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。

活性化サケ精子DNAを鋳型／プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。

●10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物を74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

1 kb DNA を増幅する場合

98℃、10 sec 68℃、1 min

30 cycles

または

98℃、10 sec 55℃、30 sec 72℃、1 min

30 cycles

（注意）
・基本的には2ステップPCRをお勧めします。プライマーのTm値が低く、2ステップPCRが難しい場合には、3ステップPCRをお試しください。
・変性の条件は、使用機種とチューブの種類にあわせて設定してください。変性時間の設定の目安は、94℃の場合は20 sec～30 sec、98℃の場合は1sec～10sec です。

Pyrobest DNA polymeraseを用いて増幅したPCR産物の多くは平滑末端である。したがって、そのPCR産物をそのまま(必要に応じてリン酸化して)平滑末端のベクターにクローニングすることが可能である。

●大腸菌ゲノムDNAを鋳型としたPCR反応（増幅産物8 kb）において良好な増幅が見られることを確認している。
●ヒトゲノムDNAを鋳型としたsingle copy gene（p53遺伝子）のPCR反応（増幅産物2.9 kb）において良好な増幅が見られることを確認している。

Polymerase Chain Reaction（PCR）法によるDNA増幅、特に正確性が要求されるPCRに最適。

イノシンを含むプライマーの使用は避けてください。

弊社では、さまざまな特長をもつPCR酵素を用意しています。
用途に応じて選択してください。

PCR Enzyme選択フローチャート