製品説明
Premix Ex Taq (Perfect Real Time) は、検出にプローブを用いるリアルタイムPCR用に開発された製品である。2×濃度のプレミックスタイプ試薬で、反応液の調製が簡単である。抗
Taq抗体を利用したホットスタート用酵素
TaKaRa Ex Taq HSとリアルタイムPCR用に最適化されたバッファーの組み合わせにより、非特異的増幅を抑制し、高い増幅効率、高い検出感度でリアルタイムPCRを行うことができる。高速PCRに適しており、幅広いダイナミックレンジで正確なターゲットの定量、検出が行えるので、再現性よく信頼性の高いリアルタイムPCR解析が可能である。
本製品を2ステップリアルタイムRT-PCRに使用する場合には、リアルタイムRT-PCR専用の逆転写試薬キットである
PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(製品コード RR037A/B)、または
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)(製品コード RR036A/B)、
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)(製品コード RR047A/B)との組み合わせを推奨する。
なお、本製品はThermal Cycler Dice Real Time Systemに最適化しているが以下のリアルタイムPCR装置でも使用例がある。
技術情報のProtocols、Applicationを参照してください。(詳しくは弊社までお問い合わせください。)
- Thermal Cycler Dice Real Time System III(製品コード TP950/TP970/TP980/TP990)
- Thermal Cycler Dice Real Time System II(製品コード TP900/TP960:終売)
- Thermal Cycler Dice Real Time System Lite(製品コード TP700/TP760:終売)
- CronoSTAR 96 Real-Time PCR System(製品コード 640231/640232)
- CronoSTAR Portable Real-Time PCR System(製品コード 640245/640247/640249)
- Smart Cycler System / Smart Cycler II System (Cepheid社)
- Applied Biosystems 7300/7500 Real-Time PCR System、7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)
- LightCycler(Roche Diagnostics社)
- Mx3000P(Agilent Technologies社)
など
内容
200回(50 μl 反応分)
Premix Ex Taq (Perfect Real Time) (2×conc.)*1 | 1 ml×5 |
ROX Reference Dye (50×conc.)*2 | 200 μl |
ROX Reference Dye II (50×conc.)*2 | 200 μl |
*1 TaKaRa Ex Taq HS, dNTP Mixture, Mg
2+を含む。
*2 Applied BiosystemsのリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で
解析する場合に使用する。
- ROX Reference Dye を添加する機種
・Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)
- ROX Reference Dye II を添加する機種
・ Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)
・ Mx3000P(Agilent Technologies社)
- 添加の必要がない機種
・ Thermal Cycler Dice Real Time System III(製品コード TP950/TP970/TP980/TP990)
・ Thermal Cycler Dice Real Time System II(製品コード TP900/TP960:終売)
・ Thermal Cycler Dice Real Time Lite(製品コード TP700/TP760:終売)
・ CronoSTAR 96 Real-Time PCR System(製品コード 640231/640232)
・ CronoSTAR Portable Real-Time PCR System(製品コード 640245/640247/640249)
・ Smart Cycler System(Cepheid社)
・ LightCycler(Roche Diagnostics社)
Mx3000Pの場合には、ROX Reference Dye IIが適している。
Thermal Cycler Dice Real Time SystemやSmart Cycler System、LightCyclerでは必要ない。
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TaKaRa Ex Taq HS
- ○活性の定義
活性化サケ精子DNAを鋳型/プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。
○活性測定用反応液組成
25 mM | TAPS緩衝液 (pH9.3、25℃) |
50 mM | KCl |
2 mM | MgCl2 |
0.1 mM | DTT |
各200 μM | dATP・dGTP・dCTP |
100 μM | [3H]-dTTP |
0.25 mg/ml | 活性化サケ精子DNA |
○純度
- 10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物とを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
- 10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322DNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
- 10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
保存
4℃保存:6ヵ月安定
コンタミネーションには十分注意してください。
※ 長期保存の場合は、-20℃で保存してください。いったん融解したものは4℃保存し、6ヵ月を目途にご使用ください。
用途
リアルタイムPCR
特長
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各社リアルタイムPCR装置で高い特異性を実現
反応バッファーの改良により反応特異性が大きく向上し、Applied Biosystems 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR System、Smart Cycler System、LightCyclerなど各社リアルタイム
PCR装置で特異性の高い結果が得られる。ROX Reference Dyeが添付されているため、dyeを必要とする機種にも確実に対応できる。ガラスキャピラリーを
用いる装置にもBSAを添加することなく使用可能。
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高速リアルタイムPCRにも最適
高速リアルタイムにも最適化されているため、よりスピーディーな実験が可能。
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優れたPCR反応性
TaKaRa Ex Taq HSを使用しているため増幅効率が高く、低濃度の鋳型でも高感度に検出できる。非特異的な増幅が抑えられ、
幅広いダイナミックレンジにおいて高い直線性が得られる。
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簡単で便利なプレミックスタイプ
2×濃度のプレミックスタイプ試薬であり、反応液の調製が簡単。
使用上の注意
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本製品に使用しているTaKaRa Ex Taq HSは抗Taq抗体を利用したホットスタートPCR用の酵素であり、
化学修飾タイプの酵素のように95℃10~15分の活性化ステップは必要ありません。初期変性は通常、95℃30秒で十分です。
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使用時には、泡立てないよう穏やかに転倒混合し、試薬を均一にしてから使用してください。試薬組成に偏りがあると十分な反応が得られなくなります。
ボルテックスによる混合は行わないでください。
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Premix Ex Taq(2×conc.)を-20℃で凍結保存した場合、保存中に沈殿を生じることがあります。軽く手で暖めるか室温にしばらく置いた後、
転倒混合することで完全に溶解します。沈殿が生じたままでは試薬組成に偏りができますので、必ず均一に混合してからご使用ください。
補足資料
リアルタイムPCR関連実験の各種手法をホームページでご紹介しています。あわせてご参照ください。