CycleavePCR™ 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.3

呼吸器系感染症は、様々な病原菌やウイルスによって引き起こされる。呼吸器系感染症に対して適切な治療を行うためには、原因となる病原菌、ウイルスを特定する必要があるが、ウイルスに関しては臨床症状だけで同定することは困難である。また、同定のためのウイルス分離や血清学的検査は時間がかかるため、早急な対応には対処できない。
本キットは、慶應義塾大学医学部感染症学教室 生方公子先生監修の元、呼吸器系感染症の原因となるウイルス11種－Human respiratory syncytial virus subtype A, Human respiratory syncytial virus subtype B, Human parainfluenza virus 1, Human parainfluenza virus 2, Human parainfluenza virus 3, Human metapneumovirus, Influenza A virus, Influenza B virus, Human adenovirus, Human bocavirus, Human rhinovirus－を、リアルタイムPCR装置を用いて迅速に検出するためのキットとして開発された。
本キットでは、逆転写反応に伸長性能に優れた PrimeScript RTaseを使用し、増幅反応には、Hot Start PCR用酵素TaKaRa Ex Taq HSを使用している。また、検出にはサイクリングプローブ法を採用している。
逆転写反応を行った反応液を6つに分け、それを鋳型として増幅からリアルタイム検出までを同一のチューブ内で行うため、PCR産物を確認するための電気泳動が不要で迅速に結果を得ることができる。また、増幅産物による汚染、他のサンプルへのコンタミネーションの危険性をさけることができる。
なお、各ターゲットのPositive Controlが含まれており、より確実に判定を行うことが可能である。（Ver.3では、プライマーをより最適化した配列に変更した。）

（逆転写反応 20 μl×10反応、リアルタイムPCR 25 μl×10反応×6種類）

1.	2×RT Buffer Mix*1	100 μl（10反応分）
2.	PrimeScript RT Enzyme Mix I*2	10 μl（10反応分）
3.	2×CycleavePCR Reaction Mix*3	750 μl（60反応分）
4.	Probe/Primer Mix-1*4	20 μl（10反応分）
5.	Probe/Primer Mix-2*4	20 μl（10反応分）
6.	Probe/Primer Mix-3*4	20 μl（10反応分）
7.	Probe/Primer Mix-4*4	20 μl（10反応分）
8.	Probe/Primer Mix-5*4	20 μl（10反応分）
9.	Probe/Primer Mix-6*4	20 μl（10反応分）
10.	RNase free dH2O	1 ml
11.	Positive Control 1 - FAM	10 μl
12.	Positive Control 1 - ROX	10 μl
13.	Positive Control 2 - FAM	10 μl
14.	Positive Control 2 - ROX	10 μl
15.	Positive Control 3 - FAM	10 μl
16.	Positive Control 3 - ROX	10 μl
17.	Positive Control 4 - FAM	10 μl
18.	Positive Control 4 - ROX	10 μl
19.	Positive Control 5 - FAM	10 μl
20.	Positive Control 5 - ROX	10 μl
21.	Positive Control 6 - FAM	10 μl

*1 逆転写反応に必要なバッファー、dNTP Mixture、ランダムプライマーを含む。
*2 PrimeScript RTase、RNase Inhibitorを含む。
*3 反応に必要なバッファー、dNTP Mixture、酵素を含む。融解させる際、vortexは使用しないこと。
*4 蛍光標識プローブが含まれているため、遮光に留意すること。

－20℃
（注意）
2×CycleavePCR Reaction Mixには酵素が含まれており、凍結融解の繰り返しにより活性が低下する恐れがあるため、一度融解した後はいくつかのチューブに分注して－20℃保存することをお勧めします。長期保存するのでなければ、融解後は4℃で保存しておくことも可能です。

Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual”を用意している。
キットに添付の取扱説明書とあわせて使用する。
定性解析（＋／－判定）用（PDF、946 K）

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「遺伝子検査（食品・水質・家畜他）」関連のお役立ち情報専用ページもご参照ください。