1 step RT-qPCR用の第一推奨試薬（非特異的増幅を効果的に抑制）
- 新規逆転写酵素 PrimeScript PLUS RTaseを使用
- アクセサリータンパク質の添加により非特異的増幅を効果的に抑制
製品説明
One TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time)は、インターカレーター法による1ステップリアルタイムRT-PCR専用のキットである *。RT-PCRを1チューブ内で連続的に行えるため、操作が簡便でコンタミネーションの心配がない。また、増幅産物をリアルタイムで検出でき、PCR後に電気泳動などで確認する必要がない。RNAウイルスなど微量RNAの検出に最適である。
本製品では、1ステップリアルタイムRT-PCR用に開発された新規逆転写酵素とホットスタートPCR酵素として定評のあるTaKaRa Ex Taq HSの組み合わせにより、効率よく高感度な検出ができる。また、最適化された反応バッファーとアクセサリータンパク質の添加により非特異的増幅を抑制し、高い反応性を実現している。
本製品の適応機種
本製品は、以下の各種リアルタイムPCR装置で良好に反応できることを確認している。
技術情報のProtocolsや説明書を参照してください。
本製品では、1ステップリアルタイムRT-PCR用に開発された新規逆転写酵素とホットスタートPCR酵素として定評のあるTaKaRa Ex Taq HSの組み合わせにより、効率よく高感度な検出ができる。また、最適化された反応バッファーとアクセサリータンパク質の添加により非特異的増幅を抑制し、高い反応性を実現している。
本製品の適応機種
本製品は、以下の各種リアルタイムPCR装置で良好に反応できることを確認している。
技術情報のProtocolsや説明書を参照してください。
- Thermal Cycler Dice Real Time System III（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990）
- Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
- Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700/TP760：終売）
- CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
- CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
- Applied Biosystems 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR System、
StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社） - LightCycler（Roche Diagnostics社）
- Smart Cycler System/Smart Cycler II System（Cepheid社）など
* プローブを用いる1ステップリアルタイム RT-PCRには、One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（製品コード RR064A/B）を使用してください。
内容
（100回分；50 μl反応系）
*1 dNTP Mixture、Mg2+およびTB Greenを含む。
*2 逆転写酵素、RNase Inhibitorを含む。
*3 TaKaRa Ex Taq HSおよびアクセサリータンパク質を含む。
*4 Thermo Fisher Scientific社のリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。
◆ROX Reference Dye を添加する機種
・Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
・StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆ROX Reference Dye II を添加する機種
・Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆添加の必要がない機種
・Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990、TP900/TP960/TP700/TP760：終売）
・CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
・CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
・LightCycler（Roche Diagnostics社）
・Smart Cycler System/Smart Cycler II System（Cepheid社）
| 2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 *1 | 840 μl×3 |
| PrimeScript PLUS RTase Mix *2 | 100 μl |
| TaKaRa Ex Taq HS Mix *3 | 300 μl |
| RNase Free dH2O | 1.25 ml×2 |
| ROX Reference Dye (50×conc.) *4 | 100 μl |
| ROX Reference Dye II (50×conc.)*4 | 100 μl |
*1 dNTP Mixture、Mg2+およびTB Greenを含む。
*2 逆転写酵素、RNase Inhibitorを含む。
*3 TaKaRa Ex Taq HSおよびアクセサリータンパク質を含む。
*4 Thermo Fisher Scientific社のリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。
◆ROX Reference Dye を添加する機種
・Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
・StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆ROX Reference Dye II を添加する機種
・Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
◆添加の必要がない機種
・Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ（製品コード TP950/TP970/TP980/TP990、TP900/TP960/TP700/TP760：終売）
・CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
・CronoSTAR Portable Real-Time PCR System（製品コード 640245/640247/640249）
・LightCycler（Roche Diagnostics社）
・Smart Cycler System/Smart Cycler II System（Cepheid社）
保存
－20℃
2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4は、遮光して－20℃にて保存すること
2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4は、遮光して－20℃にて保存すること
特長
- 1ステップリアルタイム RT-PCRによりRNAウイルスなど微量RNAの解析を迅速かつ正確に行うことが可能である。
- 新規逆転写酵素PrimeScript Plus RTaseと、Hot Start用PCR酵素TaKaRa Ex Taq HSの組み合わせにより、効率良く高感度な検出ができる。また、最適化された反応バッファーとアクセサリータンパク質の添加により非特異的増幅を効果的に抑制する。
- バッファーはTB Greenをあらかじめ含む2×濃度のプレミックスであり、酵素類もプレミックス化しているため、反応液の調製が簡単である。
本キット以外に必要な試薬、機器（主なもの）
- リアルタイムPCR装置（authorized instruments）
- 専用反応チューブあるいはプレート
- PCR用プライマー*1
- マイクロピペットおよびチップ（オートクレーブ処理したもの）
*1 PCR用プライマーの設計方法は、「プライマー設計について」を参照する。
使用上の注意
本キットによる逆転写反応には、PCR用のSpecific Primer (Reverse)を用いる。Random PrimerやOligo dT Primerは使用できない。
リアルタイムRT-PCR用プライマーを作製します「Perfect Real Timeサポートシステム」
Perfect Real Timeサポートシステム for インターカレーターは、インターカレーター法（TB Green検出）によるリアルタイムRT-PCR用に最適化されたプライマーを検索・オンライン注文するためのシステムです。
ヒト、マウス、ラット、ウシ、イヌ、ニワトリ、イネ、シロイヌナズナのRefSeq登録遺伝子またはEnsembl Plants登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマーを設計しています。
ターゲット遺伝子を検索し、ご希望のプライマーセットを選択すれば簡単にオンラインで注文できます。わずらわしいプライマー設計と反応条件の至適化作業はもう不要です。siRNAの効果の確認、DNAマイクロアレイ解析結果の検証など遺伝子発現定量や遺伝子検出にどうぞお気軽にご利用ください。
サポートシステムはこちら
* プライマーによっては1ステップの系では十分に性能を発揮できない場合がありますが、その場合にはTB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）または TB Green Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR420S/A/B）等を用いる2ステップRT-PCRでお試しください。
ヒト、マウス、ラット、ウシ、イヌ、ニワトリ、イネ、シロイヌナズナのRefSeq登録遺伝子またはEnsembl Plants登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマーを設計しています。
ターゲット遺伝子を検索し、ご希望のプライマーセットを選択すれば簡単にオンラインで注文できます。わずらわしいプライマー設計と反応条件の至適化作業はもう不要です。siRNAの効果の確認、DNAマイクロアレイ解析結果の検証など遺伝子発現定量や遺伝子検出にどうぞお気軽にご利用ください。
サポートシステムはこちら
* プライマーによっては1ステップの系では十分に性能を発揮できない場合がありますが、その場合にはTB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）または TB Green Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR420S/A/B）等を用いる2ステップRT-PCRでお試しください。
リアルタイムPCR関連実験の各種手法をホームページでご紹介しています。あわせてご参照ください。
Protocols
Thermal Cycler Dice® Real Time Systemシリーズを用いる場合の操作方法
Smart Cycler II System を用いる場合の操作方法
Applied Biosystems 7300/7500 Real-Time PCR SystemおよびStepOnePlus Real-Time PCR Systemを用いる場合の操作方法
LightCyclerを用いる場合の操作方法
実験条件の選び方（製品コード RR096A/B）
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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