逆転写酵素PrimeScript シリーズ

PrimeScript RTaseは、42℃の反応温度において優れたcDNA合成能を示します。
PrimeScript RTaseおよび各社逆転写酵素について、RNA Ladderを鋳型として1 st strand cDNA合成を行い一定量をアルカリ変性ゲルで電気泳動後、SYBR Green IIで染色し、蛍光イメージアナライザーで検出しました。
PrimeScript RTaseは、短鎖cDNAから長鎖cDNAまで、バックグラウンドの少ない、すなわち完全長の割合が高いcDNA合成が可能であることが確認できました。

※逆転写反応は各社推奨の反応条件で実施
（弊社取得データ)

さまざまな実験のスタートになる逆転写反応ですが、その正確性は見逃されがちです。
PrimeScript RTaseと各社逆転写酵素についてヒト胎盤由来total RNA 100 ngからOligo dTプライマーで逆転写を行い、得られたcDNA（RNA 5 ng相当）を鋳型としてTFR遺伝子500 bpをHigh Fidelity PCR酵素 PrimeSTAR HSで増幅し、クローニングしました。
そのシーケンスを確認し、総塩基数（約20万塩基）中のエラー塩基数の割合をエラー率としたところPrimeScriptによる逆転写反応の正確性が最も高いことが確認できました。
（弊社取得データ）

PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time）をはじめとしたリアルタイムPCR用のPrimeScript RTシリーズは下のデータに示すように、広い濃度範囲（1 pg～1 μg total RNA※）で、高いリニアリティを実現することが可能です。さらにOligo dTとRandom 6mersの2種類のプライマーを用いることにより、効率よくリアルタイムPCRを行うことが可能です。
※10 μlの反応系

【RR036 PrimeScript RT Master Mix, RR037 PrimeScript RT reagent Kitと他社キットの性能比較】
各キットの推奨条件で逆転写反応を行い、リアルタイムPCRにおける検量線の直線性と逆転写効率を比較した結果、PrimeScript RTシリーズは低濃度から高濃度まで、高い直線性と逆転写効率を実現することが確認できました。
（弊社取得データ）

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PrimeSript II RTaseは、PrimeScript RTaseにアクセサリータンパク質を用いて改良を加え、cDNA合成の阻害要因を極限まで抑制した逆転写酵素です。
PrimeSript II RTaseを用いると、特にOligo dTプライマーを利用するPoly Aからの伸長反応において、RNA分解の恐れのない42℃の反応で、より高品質の完全長cDNA合成産物を得ることができます。
また反応液調製時に生じるミスプライミングに起因する非特異的な伸長反応が抑制されているため、反応液調製後、氷上に置いたまま反応開始までに時間を要してもcDNA合成阻害は起こりません。

PrimeScript IIの高性能をご紹介