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ヒト心臓由来total RNA 1 μgを鋳型にOligo dT Primer を用いてcDNA合成を行い、
Dystrophin遺伝子のpolyA近傍から6,930塩基の長鎖のcDNA量をリアルタイムPCRにより定量した。
PrimeScript II RTaseはPrimeScript RTaseやA社酵素を上回る伸長性を示し、
短時間の逆転写反応においても優れたcDNA合成能を有することが確認できた。
ヒト心臓由来total RNA 1 μgを鋳型にOligo dT Primer を用いてcDNA合成を行うための反応液を調整し、
0~30分間氷上に放置した後、逆転写反応を行い、95℃まで加熱して反応を停止した。
この反応液を鋳型として、Dystrophin遺伝子の6,930塩基についてリアルタイムPCRで定量した。
PrimeScript II RTaseは反応液の氷上放置が長くなっても非特異的伸長産物が増加せず、
その後の逆転写反応においても長鎖cDNA合成の阻害は全く見られなかった。
20 mM | Tris-HCl, pH7.8 |
100 mM | NaCl |
1 mM | EDTA |
1 mM | DTT |
1% | Tween 20 (v/v) |
50% | Glycerol (v/v) |
250 mM | Tris-HCl, pH8.3 |
375 mM | KCl |
15 mM | MgCl2 |
50 mM | Tris-HCl, pH 8.3 |
75 mM | KCl |
8 mM | MgCl2 |
10 mM | DTT |
20 μg/ml | (rA)n・(dT)12-18 |
0.5 mM | [3H]dTTP |
0.1% | NP-40 |
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