CellAmp™ Whole Transcriptome Amplification Kit (Real Time) Ver.2

本製品は、少数の細胞（1～1,000個）から直接cDNAの増幅を行うキットである。増幅したcDNAはリアルタイムPCRの鋳型として使用できる。通常、微量な核酸を取り扱う際には精製によるロスが問題となるが、本製品を用いるとRNAやcDNAの精製を行うことなく効率よくcDNAを増幅できる。本製品ではまず細胞溶解を行い、引き続きdTアダプタープライマー（RT dT Primer 2）を用いた逆転写反応により、mRNAからcDNA合成を行う。次に合成したcDNAにTdTでdA tailを付加し、これを鋳型とした少ないサイクルでのPCRによりcDNAを増幅する。
本製品は細胞から直接cDNA増幅を行うほか、微量なRNA（20 pg～20 ng）からのcDNA増幅にも利用できる。
Ver.2では、Exonuclease I処理のステップを追加することにより、従来品に比べてプライマー由来の非特異的増幅が抑制され、発現量の少ない遺伝子の増幅効率が向上している。

（5 μl反応系、100回用）

1.	Lysis Buffer（4×）	150 μl
2.	Recombinant RNase Inhibitor（40 U/μl）	30 μl
3.	RT dT Primer 2	12 μl
4.	dNTP Mixture（2.5 mM each）	12 μl
5.	MgCl2（22.5 mM）	36 μl
6.	RT Enzyme Mix 2*1	36 μl
7.	Exonuclease I（5 U/μl）	72 μl
8.	TdT Buffer（5×）	144 μl
9.	dATP（90 mM）	24 μl
10.	TdT Enzyme Mix*2	54 μl
11.	PCR Primer Mix 2	300 μl
12.	RNase Free dH2O	1 ml

*1 PrimeScript Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor を含む。
*2 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase、RNase H を含む。

－20℃

本製品では、cDNAをPCRで均一に増幅するために、1st strand cDNAの合成鎖長が適度な長さになるように調節しています。そのため、リアルタイムPCR用のプライマーは、mRNAの3'末端から約1 kb以内に設計することを推奨します（mRNAの3'末端から離れた位置では、効率よく増幅されない可能性があります）。
Perfect Real Timeサポートシステムのプライマーを使用する場合は、逆転写反応にOligo dT Primerを用いる実験に使用できるプライマー（検索結果のpositionの欄で「dT」のマークがあるプライマー）を選択し、なおかつ増幅位置が、mRNAの3'末端から約1 kb以内にあるものを使用してください。

細胞から直接cDNAを増幅する場合

Perfect Real Timeサポートシステム（PRTSS）は、遺伝子発現定量PCR解析のためのリアルタイムPCR用プライマー・プローブ合成受託サービスです。目的に応じてインターカレーター法、蛍光標識プローブ法から選択できます。
PRTSS for インターカレーターは、ヒト、マウス、ラット、ウシ、イヌ、ニワトリ、イネ、シロイヌナズナのRefSeq登録遺伝子またはEnsembl Plants登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマーを設計しています。
PRTSS for プローブは、ヒト、マウス、ラットのRefSeq登録遺伝子に対して網羅的にリアルタイムRT-PCR用のプライマー・プローブを設計しています。
ターゲット遺伝子を検索し、ご希望のプライマー・プローブセットを選択すれば簡単にオンラインで注文できます。わずらわしいプライマー・プローブ設計と反応条件の至適化作業はもう不要です。siRNAの効果の確認、DNAマイクロアレイ解析結果の検証など遺伝子発現定量や遺伝子検出にどうぞお気軽にご利用ください。
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* プライマーによっては1ステップの系では十分に性能を発揮できない場合がありますが、その場合にはTB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR820S/A/B）または TB Green Premix Ex Taq（Tli RNaseH Plus）（製品コード RR420S/A/B）等を用いる2ステップRT-PCRでお試しください。

リアルタイムPCR関連実験の各種手法をホームページでご紹介しています。あわせてご参照ください。