細胞・組織用凍結保存液セルバンカーシリーズ（STEM-CELLBANKER^®）

STEM-CELLBANKER GMP Gradeは、ES細胞、iPS細胞、間葉系幹細胞などに最適化された細胞凍結保存液で、GMPに準拠した製造管理および品質管理を行っている。細胞の凍結保存のほか、組織の凍結保存も可能である。
STEM-CELLBANKER EX GMP Gradeは、静脈注射で実績のある成分を使用したシンプルな組成から構成された細胞凍結保存液である。
DMSOに敏感な細胞やDMSOの存在が気になる実験には、DMSO Freeタイプもラインナップされている。
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【セルバンカーシリーズ】
* 製品名は従来のカタカナ表記からすべて英語表記に変更。製品内容および価格には変更なし。

製品に関する詳細情報はゼノジェンファーマ株式会社のホームページをご確認下さい。

2～8℃

凍結プロトコール

より良い結果を得るために、対数増殖期にある細胞で凍結保存を行うことを推奨します。

1. 細胞汚染の有無や細胞の状態を確認し、従来の方法に従って試験管などに収集する。
2. 細胞のカウントを行い、細胞数や生存率を確認する。
3. 遠心分離（1,000～2,000 rpm　3～5分　4℃）し、アスピレーターで上清を取り除く。
4. 5×10⁵～5×10⁶個の細胞に対し1 mlのCELLBANKERを加え優しくピペッティングする。
5. 細胞懸濁液をクライオチューブ（細胞の情報を記載したもの）に分注する。
6. －80℃のディープフリーザーで凍結保存する。
7. 必要に応じて液体窒素タンクで凍結保存する。

「細胞の凍結保存」の操作手順を動画でご覧下さい。

融解プロトコール

1. 凍結しておいたクライオチューブを37℃温浴などで振りながら迅速に融解する。
2. 直ちに培養する培地10 ml程度に混和する。
3. 遠心分離（1,000～2,000 rpm　3～5分　4℃）し、アスピレーターで上清を取り除く。
4. 適量の培地で懸濁し、培養フラスコなどの容器に移す。
5. 常法にて培養を行う。

CELLBANKERシリーズおよび従来の凍結保存液を用いた場合の細胞増殖の比較

各CELLBANKERおよび従来の凍結保存液（90％FBS＋10％DMSO）を用いてHepG2およびSK-007細胞を凍結保存後、培養した。CELLBANKERシリーズのいずれの試薬においても培養開始から1日目、2日目の細胞増殖率が高いことが確認された。

ヒトiPS細胞の細胞塊での凍結保存

細胞塊（コロニー）状態のヒトiPS細胞株を遠心管に回収し、STEM-CELLBANKER GMP Gradeに懸濁してクライオチューブに分注した。37℃で3分間浸漬させた後、－152℃で凍結保存を行った。一週間後に細胞を解凍し、培養した。

ドライアイスを用いたヒトiPS細胞の輸送試験

凍結保存したヒトiPS細胞の輸送には、液体窒素を用いたドライシッパーが用いられることが多い。STEM-CELLBANKER Gradeを用いて凍結保存したヒトiPS細胞をドライアイス中で輸送可能であるか検討を行った。

＜方法・結果＞
STEM-CELLBANKER GMP Gradeを用いて凍結保存したヒトiPS細胞を、ドライアイスを入れた発砲スチロールで梱包し、4℃で48時間保管した。その後、ヒトiPS細胞を融解してフィーダー細胞上へ播種し、6日間培養を行った。コントロールには-152℃で保存していた細胞を用いた。
解凍3日目、4日目、6日目に細胞の形態を観察したところ、いずれの細胞も同様の形態を示し、コロニーを形成していた。また、6日目にアルカリホスファターゼ（ALP）で染色したところ、同様の染色結果が得られ未分化状態にも差がない事が確認された。以上より、STEM-CELLBANKER GMP Gradeで保存したヒトiPS細胞は、ドライアイスを用いた輸送が可能であることが確認できた。

STEM-CELLBANKER GMP Gradeを使用したマウス腫瘍細胞の組織保存試験

＜方法＞

4T1細胞（マウス乳癌細胞）をBALB/cマウスに皮下投与した。3～4週間後に腫瘍組織を摘出し、5 mm角に細分化後、STEM-CELLBANKER GMP Gradeを用いて－152℃で凍結保存した。保存した組織を融解し、マウス背部への移植（a）および培養（b）を行った。

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