製品説明
本製品は、真菌類のribosomal DNA（rDNA）領域内のITS1領域（150～500 bp）をPCR増幅することができる試薬、およびPCR増幅産物のシーケンスのためのプライマーから成るキットである。本キットを使用して得られた増幅産物に対して、キットのシーケンスプライマーを用いた塩基配列解析を行い、得られた塩基配列とデータベース上の配列との相同検索により、真菌の分類を行うことができる。PCR酵素には改良型Taq DNA polymeraseを使用しているので、高速PCR条件により、PCR増幅を迅速に行うことができる。
また、本酵素は抗体を用いたホットスタートPCR用の酵素なので、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。
※ 本キットのプライマーを用いる解析方法は、第十八改正日本薬局方 参考情報「遺伝子解析による微生物の迅速同定法」に収載されています。
注意： 本キットは、真菌の種類によってはPCR増幅できない場合があります。
なお、細菌の場合は、Bacterial 16S rDNA PCR Kit（製品コード RR180A）、または、Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast (800)（製品コード RR182A）をご利用ください。
※ 本キットのプライマーを用いる解析方法は、第十八改正日本薬局方 参考情報「遺伝子解析による微生物の迅速同定法」に収載されています。
注意： 本キットは、真菌の種類によってはPCR増幅できない場合があります。
なお、細菌の場合は、Bacterial 16S rDNA PCR Kit（製品コード RR180A）、または、Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast (800)（製品コード RR182A）をご利用ください。
内容
25 μl PCR反応、50回
| 1 | TaKaRa Taq HS Fast Detect Premix | 2× | 625 μl |
| 2 | rDNA ITS1 Primer Mix＊1 | 10× | 125 μl |
| 3 | dH2O | 650 μl | |
| 4 | Positive Control（S. cerevisiae DNA） | 1 ng/μl | 25 μl |
| 5 | Sequencing Primer ITS1 F | 7.5 pmol/μl | 50 μl |
| 6 | Sequencing Primer ITS1 R | 7.5 pmol/μl | 50 μl |
| ＊1 | rDNA ITS1 Mixに含まれるプライマーは、Sequencing Primer ITS1 FおよびSequencing Primer ITS1 Rと同じ配列です。 |
保存
－20℃
TaKaRa Taq HS Fast Detect PremixにはPCR酵素が含まれているため、過剰に凍結融解を繰り返すと活性が低下する場合がありますのでご注意ください。
融解の際は激しい攪拌を避け、融解後は穏やかにチューブを転倒混和してください。
TaKaRa Taq HS Fast Detect PremixにはPCR酵素が含まれているため、過剰に凍結融解を繰り返すと活性が低下する場合がありますのでご注意ください。
融解の際は激しい攪拌を避け、融解後は穏やかにチューブを転倒混和してください。
DNA増幅産物のシーケンス解析
キットに含まれるSequencing Primer ITS1 Fを使用して、得られた精製増幅産物のシーケンス解析（片鎖解析）を行う。
必要に応じて、Sequencing Primer ITS1 Rを使用した両鎖解析を行う。両鎖解析の場合、精度の高いシーケンスデータが得られる。
※ シーケンス解析には、タカラバイオ受託サービス「プレミックスシーケンス解析」のご利用をお勧めします。
＜プレミックスシーケンス解析をご依頼いただく場合＞
以下の混合物を準備する。
上記混合物を1つのウェルに分注する。
シーケンスは、ご自身で行われることも可能です。
その場合、キットのシーケンス用プライマーは7.5 pmol/μlとなっていますので、適宜使用量を調整してご使用ください。
必要に応じて、Sequencing Primer ITS1 Rを使用した両鎖解析を行う。両鎖解析の場合、精度の高いシーケンスデータが得られる。
※ シーケンス解析には、タカラバイオ受託サービス「プレミックスシーケンス解析」のご利用をお勧めします。
＜プレミックスシーケンス解析をご依頼いただく場合＞
以下の混合物を準備する。
| 精製増幅産物 | 20～150 ng |
| Sequencing Primer ITS1 F or ITS1 R (7.5 pmol/μl) | 1 μl |
| 滅菌精製水 | 全量を15 μlとする |
- 精製して得られた増幅産物を1反応につき20～150 ngご用意ください。（両鎖解析の場合、1サンプルについて2反応となりますので、最大40～300 ng の精製増幅産物が必要となります。）
- 1つの反応ウェルについて1つのSequencing Primer（7.5 pmol/μl）1 μlを加え、全量を15 μl／ウェルとなるように調製いただき、ご送付ください。
シーケンスは、ご自身で行われることも可能です。
その場合、キットのシーケンス用プライマーは7.5 pmol/μlとなっていますので、適宜使用量を調整してご使用ください。
キット以外に必要な試薬・機器（主なもの）
- 遺伝子増幅システム（authorized instruments）
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch（製品コード TP350）
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient（製品コード TP600） - PCRチューブ＊
0.2 ml Hi-Tube Dome Cap（製品コード NJ200）
0.2 ml Hi-8-Tube（製品コード NJ300）
0.2 ml Hi-8-Dome Cap（製品コード NJ301）
0.2 ml Hi-8-Flat Cap（製品コード NJ302）＊ TaKaRa PCR Thermal Cycler Fast（販売終了）には、Flat Cap型のチューブをご使用ください。 Dome Cap型のチューブは使用できません。詳細は、各装置の取扱説明書をご確認ください。 - アガロース電気泳動装置
Mupid-2plus（製品コード M-2P）
Mupid-exU（製品コード EXU-1）
Mupid-One（製品コード O1-01） - アガロースゲル
Agarose L03「TAKARA」（製品コード 5003/5003B）
PrimeGel Agarose PCR-Sieve（製品コード 5810A）など - DNA染色剤
SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain（製品コード 5760A/5761A）
エチジウムブロマイド
注）SYBR Green I を使用する場合は専用のフィルターが必要です。 - マイクロ遠心機
- マイクロピペットおよびチップ（オートクレーブ処理したもの）
- DNA調製試薬
SimplePrep reagent for DNA（製品コード 9180）
NucleoSpin Plant II（製品コード 740770.10/.50/.250）
NucleoSpin Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250）
NucleoSpin Soil（製品コード 740952.10/.50/.250）など - PCR産物精製試薬
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10/.50/.250）など
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日本薬局方収載プライマーによるPCR産物のシーケンス解析で細菌を推定（16S rDNA領域の約0.8 kb）
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NucleoSpin® Plant II
植物からの高純度、高収量ゲノムDNA精製
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Bacterial 16S rDNA PCR Kit
PCR産物のシーケンス解析で細菌を推定（16S rDNA領域の全長約1.5 kb）
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ユニバーサルプライマー一覧
- 注意事項
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