Cloned
反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は、鋳型、プライマー（DNAおよびRNAともに可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する。本酵素は、E. coli DNA polymeraseＩの構造遺伝子pol Aの開始コドンから下流約1,000 bpまでを欠失させたものをクローニングした大腸菌より精製している。そのため、3’→5’ exonuclease活性は含まれるが、5’→3’ exonuclease活性は全く含まれない。
また製品コード 2140AK/BKの製品は、Kilo-Sequencing用Deletion Kit （製品コード 6030）用に濃度調製したもので、形状組成の一部をグリセロールからエチレングリコールに変えています。
また製品コード 2140AK/BKの製品は、Kilo-Sequencing用Deletion Kit （製品コード 6030）用に濃度調製したもので、形状組成の一部をグリセロールからエチレングリコールに変えています。
保存
－20℃
濃度
5 U/μl（製品コード 2140A、2140B）
2 U/μl（製品コード 2140AK、2140BK）
2 U/μl（製品コード 2140AK、2140BK）
形状
（製品コード 2140A、2140B）
（製品コード 2140AK、2140BK）
| リン酸カリウム緩衝液（pH6.5） | 50 mM |
| DTT | 1 mM |
| グリセロール | 50％ |
（製品コード 2140AK、2140BK）
| リン酸カリウム緩衝液（pH6.5） | 50 mM |
| DTT | 1 mM |
| エチレングリコール | 50％ |
添付Buffer組成（10×）
（製品コード 2140A、2140B）
| 100 mM | Tris-HCl（pH 7.5） |
| 70 mM | MgCl2 |
| 1 mM | DTT |
注意
製品コード 2140AK、2140BKには反応用バッファーは添付されていない。
活性の定義
Poly d（A-T）合成DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH7.4において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 67 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.4） |
| 6.7 mM | MgCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 20 μM | 鋳型DNA |
| 33 μM | dATP |
| 33 μM | [3H]dTTP |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
- 希釈による失活はないが、強く撹拌すると失活することがある。
- 5’→3’exonuclease活性が含まれないため、ニックトランスレーション活性を示さない。
- DNA Polymerase I と同じく、ddNTPを阻害されることなく取り込む。
- T4 DNA Polymeraseに比べて、鋳型DNAの高次構造に対しても抵抗性が高い。
- DNAに対する親和性が強く、過剰に用いるとaggregationが起こり、反応が阻害されることがある。
- 5’-突出末端の修飾に用いると、filling後に1塩基余分に付加する場合がある。6)
用途
- dideoxy法によるシーケンシング（Sanger法）3) この用途には特に製品コード 2140AK, 2140BKが適している。
- 二本鎖DNA末端の平滑化4)
- Oligonucleotide directed mutagenesisにおける二本鎖DNA合成5)
- random primerを用いたDNA標識
起源
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow fragment
触媒する反応
1．5'→3'DNA polymerase活性
鋳型、プライマー（DNA、RNA共に可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。
ddNTPによる拮抗阻害がかかりにくいのでM13 dideoxy法によるシーケンシングに用いられる。 2．一本鎖特異的3'→5' exonuclease活性
Klenowの3'→5'exonuclease活性は比較的弱い（T4 polの100～1000分の1）ので3'突出末端の平滑化には適さない。
鋳型、プライマー（DNA、RNA共に可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。
ddNTPによる拮抗阻害がかかりにくいのでM13 dideoxy法によるシーケンシングに用いられる。 2．一本鎖特異的3'→5' exonuclease活性
Klenowの3'→5'exonuclease活性は比較的弱い（T4 polの100～1000分の1）ので3'突出末端の平滑化には適さない。
一般的性質
- 分子量
68,000 - サブユニット
1分子中にZn2＋を1分子含む一本鎖単純ポリペプチド - 至適pH
pH7.4 - 補因子
Mg 2＋ - 安定性
vortex等の撹拌により失活する（ピペッティングにより混合すること）
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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