反応用バッファー添付
製品説明
本酵素は一本鎖特異的endonucleaseであり、5’-P末端をもつモノまたはオリゴヌクレオチドを生成する。過剰量（1,000倍）の酵素を用いれば、オリゴマーもすべてモノヌクレオチドになる。二本鎖DNAやRNA、あるいはDNA-RNAハイブリッドに対しては、多量の酵素を用いないと分解することはできないが、この場合にはAT richな領域を選択的に分解する。A↓pN、T↓pN siteを好み、特にA↓pN siteは100％分解するが、C↓pC、C↓pG siteは分解が困難である。
保存
－20℃
濃度
40 U/μl
形状
| 10 mM | Tris-HCl（pH7.5） |
| 0.1 mM | 酢酸亜鉛 |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 300 mM | CH3COONa（pH5.0） |
| 1,000 mM | NaCl |
| 10 mM | (CH3COO)2Zn |
| 50％ | グリセロール |
活性の定義
熱変性仔牛胸腺DNAを基質として、37℃、pH5.0において、1分間に1 μgの酸可溶性分解物を生成する酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 30 mM | 酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.0） |
| 100 mM | NaCl |
| 1 mM | 酢酸亜鉛 |
| 10％ | グリセロール |
| 0.5 mg/ml | 基質DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
使用上の注意
- 本酵素は、pH5.0では0.1 mM Zn2＋、1 mM cystein、0.005％ TritonX-100がないと徐々に失活するが、pH7.0では添加物なしで安定である。pHが低いと一本鎖への特異性が弱まる。1)
- 本酵素はEDTA存在下での熱処理、または0.01％ SDSにより完全に失活する。
- 本酵素の二本鎖識別能力は塩基配列に依存しており、切断点はA↓pNおよびT（U）↓pNを好む3)。特にA↓pAは完全に分解するが、GおよびCの配列はほとんど分解しない。
- 本酵素はS1 Nucleaseと異なり、ニックの反対側の鎖は切れない4)。
用途
- 二本鎖DNA末端の平滑化（ただし、平滑化の効率は塩基配列に依存するので注意する）。
- ハイブリダイゼーションのマッピング（S1 mapping）。
特に本酵素はS1 Nucleaseに比べてnibblingが起こりにくく、正確なバンドを与える5)。
起源
Mung bean sprouts
一般的性質
- 分子量
39,000
糖タンパク質 - サブユニット
25,000と15,000へテロダイマー1) - 至適pH
pH5.0（50 mM酢酸ナトリウム緩衝液、pH8.0ではこのときの0.01％活性）
pH5.0では、0.1 mM Zn2＋、1 mM cystein、0.005％ TritonX-100がないと徐々に失活するが、pH7.0では添加物なしで安定。pHが低いと一本鎖への特異性が弱まる1）。 - 補因子
Zn2＋が必須 - 阻害剤1）
EDTAで不可逆的に失活
0.01％SDS（at pH5.0）で完全失活
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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